国家科技攻关计划(2004BA519A53)
- 作品数：15 被引量：36H指数：3
- 相关作者：王志亮陈义平赵永刚赵云玲王君玮更多>>
- 相关机构：中国动物卫生与流行病学中心农业部动物检疫所扬州大学更多>>
- 发文基金：国家科技攻关计划青岛市科技发展计划项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 绵羊PrP前体蛋白基因真核表达载体的构建及汉逊酵母中的初步表达
- 2008年
- 根据已知的绵羊PRNP基因序列设计引物,扩增出完整的PrP前体蛋白基因,将获得的基因克隆到pGEM-T载体中,得到插入PrP前体蛋白基因的pGEM-T-OPrP质粒,经PCR、酶切、测序鉴定后,用EcoRI和NotI从pGEM-T-OPrP上切下目的片段后,连接到汉逊酵母表达载体pFMDHZ-α-A中,通过PCR、酶切、插入鉴定保证正确插入后,经电转化将重组质粒pFMDHZ-α-A-OPrP转入多形汉逊酵母中,随后通过甲醇诱导进行表达。本研究表达的绵羊PrP前体蛋白,为绵羊痒的检测及诊断、PrP的结构与功能研究奠定基础。
- 兰邹然王志亮赵永刚李金明吴晓东
- 关键词：PRP前体蛋白多形汉逊酵母
- 绵羊ARQ基因型PrP前体蛋白基因的克隆及原核表达
- 2006年
- 目的构建ARQ基因型PrP前体蛋白基因原核表达重组质粒,为TSE的检测及诊断、PrP的结构与功能研究奠定基础。方法根据GenBank中绵羊PrP基因全序列和表达载体pET28a载体的多克隆位点设计了绵羊PrP前体蛋白基因引物,以绵羊基因组DNA为模板,PCR扩增绵羊PrP前体蛋白基因,通过酶切将些基因克隆到pET28a(+)载体中,构建了重组原核表达质粒pET-OPrP。重组质粒转化E.coliBL-21感受态细胞,用IPTG诱导表达,通过PAGE电泳和Western-blo-ting鉴定表达的重组蛋白。结果在pET28a(+)载体中成功克隆了PrP前体蛋白基因,并在E.coli中成功表达了重组的PrP前体蛋白。结论绵羊PrP前体蛋白基因可以在E.coli中表达。本次克隆得到的小尾寒羊的PrP基因型为ARQ。
- 兰邹然王志亮张学成赵永刚吴晓东
- 关键词：PRP前体蛋白
- 西尼罗病毒蚊媒的种类、研究进展及监控措施被引量：9
- 2005年
- 于萍魏荣王志亮杨艳菊
- 关键词：西尼罗病毒蚊媒防制
- 新疆地方绵羊品种PrP基因型研究
- 从新疆采取了8个地方绵羊品种的血液样品171份,提取绵羊基因组DNA,用PCR方法扩增绵羊PrP基因,通过序列测定,对它们的PrP基因型进行研究,确定了PrP基因136、154、171位密码子的多态性为136(A/A),...
- 兰邹然刘雨田王志亮张学成阿依土拉张鲁安
- 关键词：PCR多态性
- 文献传递
- 印第安纳型水泡性口炎病毒核衣壳蛋白基因在毕赤酵母表达系统中的表达被引量：1
- 2006年
- 将含有IN型VSV核衣壳蛋白基因的重组质粒pET-32a/N用EcoRI和NotI进行双酶切,目的基因克隆到表达载体pPICZαA,构建重组质粒pPICZαA/N。用SacI酶切线性化,并以电转化方法转化受体酵母菌GS115,PCR证实目的基因整合到重组酵母菌染色体中,经鉴定所获得的重组酵母菌株为Muts表型。用甲醇对重组酵母进行诱导表达,经SDS-PAGE和Westernblot鉴定,核衣壳蛋白基因在毕赤酵母中获得表达,目的蛋白分子量大小为约75kDa,表达量约占菌体总量的20%,并能够被VSV阳性血清所识别,可用于VSV的血清学检测。
- 陈义平盛祖勋赵永刚王宝安王志亮
- 关键词：水泡性口炎病毒核衣壳蛋白基因毕赤酵母表达系统
- 新疆地方绵羊品种PRNP基因多态性研究
- 2006年
- 从新疆采取了8个地方绵羊品种的血液样品171份,提取绵羊基因组DNA,用PCR方法扩增绵羊PRNP基因,通过序列测定,对它们的PRNP基因型进行研究,确定了PRNP基因136、154、171位密码子的多态性为136(A/A),154(H/R)和171(Q/R/H/K),结果发现所检测的新疆地方绵羊品种PRNP基因136位密码子均为A,其基因型均为A型痒病抵抗性基因型。
- 兰邹然阿依土拉张鲁安张学成刘雨田王志亮
- 关键词：PCR多态性
- 猪链球菌2型38000蛋白主要功能区基因的克隆与表达被引量：2
- 2008年
- 根据GenBank中已发表的猪链球菌2型38000蛋白基因核苷酸序列,设计合成1对特异性引物,采用PCR方法,以四川分离株猪链球菌2型基因组DNA为模板扩增38000蛋白主要功能区基因。将PCR产物纯化后与pMD18-T连接转化宿主菌DH5α,提取阳性质粒,进行PCR和酶切鉴定。将目的片段定向克隆到表达载体pET32a中,经测序正确后,重组质粒转化入大肠杆菌BL21(DE3),于37℃、0.8mmol/LIPTG条件下进行诱导表达,结果重组菌菌体裂解物经SDS-PAGE电泳可检测到相对分子质量约为35000的重组蛋白,表达产物经纯化后,免疫印迹法(Western blotting)证实该重组蛋白可以与猪链球菌2型阳性血清发生特异性反应。
- 王华王君玮陈义平赵永刚赵云玲徐天刚王志亮
- 关键词：猪链球菌2型克隆
- 单抗介导牛海绵状脑病免疫组化检测方法的建立及其应用被引量：8
- 2005年
- 中国鲁西黄牛重组 PrPc成熟蛋白免疫 PrPc基因敲除小鼠,利用淋巴细胞杂交瘤技术,经免疫组织化学试验筛选出单抗4C11可特异识别牛海绵状脑病标准阳性牛脑样品上PrPSc核心片段。以单抗4C11为核心试剂,建立了单抗介导牛海绵状脑病免疫组织化学检测方法,并已颁布成为中华人民共和国国家标准 GB/T19180-2003(牛海绵状脑病诊断技术)。已应用于中国牛海绵状脑病的持续监测,至 2002 年底共检测了全国各地 3344 份牛脑样品,结果全为阴性,且每批次所设的阳性对照样品检测结果均呈阳性,与 Roche 公司单抗 6H4 检测结果的符合率为 100%。
- 王志亮吴晓东刘雨田邹艳丽鲍恩东王长杰
- 关键词：免疫组化检测牛海绵状脑病免疫组织化学检测阴性阳性牛脑
- 西尼罗病毒E蛋白结构域Ⅲ特异性单克隆抗体的研制被引量：4
- 2006年
- 目的研制针对西尼罗Ⅲ重组融合蛋白的特异性单克隆抗体。方法用西尼罗Ⅲ重组融合蛋白免疫BALB/c小鼠,用淋巴细胞杂交瘤技术进行细胞融合,并用间接ELISA方法进行筛选,所获得的单抗经间接ELISA、免疫印迹和间接免疫荧光试验进行鉴定。结果共获得了3株能稳定分泌针对西尼罗河病毒E蛋白结构域Ⅲ的特异性单抗的杂交瘤细胞株,分别命名为4F7、6H3和8E4,其单抗亚类鉴定分别属于IgG1、IgG1和Ig2a。这3株单克隆抗体均能与重组西尼罗河病毒E蛋白结构域Ⅲ发生特异性反应,而与日本脑炎病毒无交叉反应,并且,8E4和6H3识别同一抗原位点,4F7识别西尼罗河病毒E蛋白结构域Ⅲ的另一抗原位点。结论本实验成功研制出针对西尼罗河病毒E蛋白结构域Ⅲ的特异性单克隆抗体,为我国建立西尼罗河病毒的病原学检测方法并与日本脑炎病毒进行鉴别诊断提供了技术贮备。
- 陈义平杨艳菊吴晓东王志亮
- 印第安纳型水疱性口炎病毒一步法RT-PCR检测方法的建立被引量：1
- 2005年
- 根据印第安纳型水疱性口炎病毒(VSV)L蛋白的序列,设计了一套特异性引物,建立了检测VSV核酸的一步法RT-PCR方法,并用该法检测了不同的组织样品。结果显示,人工感染VSV小鼠组织检测为阳性,而口蹄疫、猪水疱病、猪瘟、猪生殖与呼吸综合征等病料检测均为阴性,表明该方法具有较好的特异性。
- 盛祖勋陈义平王宝安赵永刚王志亮
- 关键词：水疱性口炎病毒一步法RT-PCR
