国家自然科学基金(30871942)
- 作品数：17 被引量：55H指数：4
- 相关作者：刘庆慧黄倢程晓艳张秀丽仇知光更多>>
- 相关机构：中国水产科学研究院黄海水产研究所中国海洋大学上海海洋大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学轻工技术与工程更多>>
- 对虾白斑综合征病毒VP12的原核表达及其与VP24和VP26的相互作用被引量：2
- 2013年
- 根据GenBank上对虾白斑综合征病毒(WSSV)囊膜蛋白基因VP12(wsv 432)的序列,设计并合成引物,PCR扩增得到VP12基因,构建重组表达载体pBAD/gⅢ–VP12并转化大肠埃希菌Top 10感受态细胞。基因工程菌株在37℃用L-阿拉伯糖诱导,表达产物经Western blot和SDS-PAGE检测显示有与预期大小19ku相符合的目的蛋白。以Co2+亲和层析方法,获得纯化VP12蛋白。采用Far-Western blot结合ELISA方法,分析VP12与WSSV结构蛋白的作用。结果表明,VP12与囊膜蛋白VP24、VP26具有相互作用,该研究对于揭示WSSV分子组装机制,阐明其致病机理具有重要意义。
- 马方方刘庆慧刘庆慧
- 关键词：对虾白斑综合征病毒原核表达相互作用
- 对虾原代细胞培养研究现状被引量：2
- 2010年
- 对对虾血细胞的原代培养进行综述。对于对虾用作细胞培养的组织和培养基进行总结,介绍了对虾用于细胞培养的组织以及原代培养的培养基和培养条件控制,还介绍了对虾细胞培养的潜在应用价值,尤其是对于病毒防治工作的价值。
- 张秀丽刘庆慧
- 关键词：细胞培养
- 副溶血弧菌tdh基因LAMP检测技术的建立被引量：9
- 2012年
- 环等温扩增技术(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP)是一种在等温条件下高特异性、高效、快速地扩增靶基因的DNA扩增技术。根据副溶血弧菌特异性的毒力基因tdh保守序列,本文设计1套特异性引物对该基因进行环等温扩增,同时对反应条件进行优化,建立携带tdh基因的致病性副溶血弧菌的LAMP快速检测技术。结果表明,LAMP最适反应在60.8℃恒温、45min内完成,与其它常见的细菌无交叉反应。LAMP方法的细菌DNA最低检出限为35.5fg/反应管,灵敏度较PCR方法高10倍。对扇贝样品中分离的菌株的检测表明,LAMP方法对检测致病性副溶血弧菌具有良好的可靠性。
- 程晓艳刘庆慧黄倢
- 关键词：副溶血弧菌
- 白斑综合征病毒感染凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)TRx、LvP38、CAT、POD基因的表达被引量：4
- 2015年
- 为比较凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)的氧化反应和信号转导相关基因在白斑综合征病毒(WSSV)感染中的变化情况,采用实时荧光定量PCR,分析WSSV感染凡纳滨对虾6、12、24、48、72 h后,鳃和类淋巴组织中硫氧还原蛋白(TRx)、p38信号通路(Lv P38)、过氧化氢酶(CAT)及过氧化物酶(POD)在m RNA转录水平的变化。结果显示,感染对虾的类淋巴组织中,TRx、Lv P38、CAT、POD在72 h时表达量最高,与对照组差异显著(P<0.05);而在鳃组织中,该4种基因在12 h时表达量最高,呈先升高后下降的趋势。推断TRx、Lv P38、CAT、POD与WSSV感染密切相关。
- 刘鹏飞刘庆慧吴垠黄倢
- 关键词：凡纳滨对虾WSSVLVP38
- 发酵条件对细菌工程菌产WSSV-VP37的影响被引量：1
- 2009年
- 在pBAD/gIIIA-VP37重组表达载体构建的基础上,研究发酵工艺参数对重组WSSV-VP37(rVP37)蛋白表达量的影响,并对重组质粒的稳定性和重组菌的生长进行研究。结果表明,pBAD/gIIIA-VP37表达的rVP37以包涵体形式存在于菌体中,发酵温度及诱导时间影响rVP37蛋白表达和菌体产量,以37℃诱导5h最佳。重组质粒在宿主菌中具有良好的分离稳定性,WSSV-VP37基因的插入对宿主菌的生长规律影响不大。
- 张秀丽杨啸刘庆慧马璀艳黄倢
- 关键词：发酵条件蛋白表达
- 对虾白斑综合征病毒VP28酵母表面展示被引量：1
- 2012年
- 以pYD1为载体,制备以酒精酵母为载体的基因工程免疫制剂。参照GenBank中对虾白斑综合征病毒VP28基因序列设计引物,PCR扩增得到预期长度的产物,双酶切插入用于酒精酵母表面展示的穿梭质粒载体pYD1,转化大肠杆菌TOP10,提取阳性质粒转化酒精酵母菌株EBY100,诱导表达后,用免疫荧光检测外源蛋白的表达。结果获得VP28酵母表面展示菌,测得最佳诱导时间为36～48h。以此展示酵母活细胞分设两个浓度组,腹腔注射螯虾,检测其毒性。结果表明,此重组酵母对螯虾是安全的,该研究为下一步对虾用活载体免疫制剂效果的研究奠定了基础。
- 李新新刘庆慧张秀丽黄倢
- 关键词：对虾白斑综合征病毒VP28酵母表面展示安全性
- 中国对虾血淋巴细胞的原代培养及其与量子点标记的VP37p的作用被引量：1
- 2012年
- 血淋巴细胞是对虾白斑综合征病毒(WSSV)靶细胞之一,WSSV结构蛋白与血淋巴细胞的作用在病毒感染中起重要作用。论文主要研究中国对虾血淋巴细胞的原代培养及在原代细胞培养条件下观察重组表达的对虾白斑综合征病毒VP37片段(VP37p)与对虾血淋巴细胞的作用。试验表明,中国对虾血淋巴细胞体外培养可存活12d,体外培养的对虾血淋巴细胞与量子点标记的VP37p具有相互作用。
- 李倩刘庆慧
- 关键词：中国对虾血淋巴细胞原代培养
- 实时荧光定量PCR检测对虾白斑综合症病毒方法的建立被引量：15
- 2010年
- [目的]根据对虾白斑综合症病毒（White Spot Syndrome Virus,WSSV）的保守序列,利用Primer5.0软件设计引物,建立了WSSV的荧光实时定量PCR检测体系。[方法]构建含有WSSV目扩增片段的质粒为标准品,进行定量PCR扩增,探索反应条件。[结果]确定了最佳退火温度（61℃）和最佳引物浓度（0.2μmol/L）,标准品浓度在8.8×1098.8×104个拷贝数之间有典型的＂s＂型扩增曲线,标准曲线中模板拷贝数（X）与Ct值的关系为Ct=-3.597lgX＋42.547,相关系数R2=0.993。[结论]该检测方法特异性强,对传染性皮下和造血器官坏死病毒（IHHNV）、肝胰腺细小病毒（HPV）没有扩增反应。
- 程晓艳刘庆慧黄倢
- 关键词：实时荧光定量PCR白斑综合症病毒
- 凡纳滨对虾β-actin基因的克隆与表达
- 2010年
- 目的:克隆凡纳滨对虾肌动蛋白基因并在原核表达系统中表达。方法:根据GenBank上凡纳滨对虾β-actin基因序列设计引物,采用RT-PCR方法,从凡纳滨对虾肌肉组织中克隆出β-肌动蛋白基因cDNA部分序列,克隆序列连接到pBAD/gⅢA质粒,转化入大肠杆菌TOP10,筛选阳性克隆,进行温度诱导表达重组蛋白。结果:克隆序列长度为1300bp,测序结果与Gene-Bank序列同源性达99.91%;获得重组体诱导表达产物经SDS—PAGE分析,在约48kD处有表达的蛋白带,表达产物经Western Blotting鉴定为阳性。结论:获得β-actin基因在大肠杆菌中稳定表达产物。
- 刘笋刘庆慧黄倢
- 关键词：凡纳滨对虾Β-ACTIN克隆
- 5种食源性致病菌多重PCR检测方法的建立被引量：8
- 2012年
- 本研究建立一种同时特异性地检测5种常见食源性致病菌的多重PCR方法。根据目前食品中常见病原菌副溶血弧菌Vibrio parahaemolyticus、金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureus、单核细胞增生性李斯特菌Listeria monocytogenes、肠炎沙门氏菌Salmonella enteritidis、福氏志贺氏菌Shigella flexneri的相关毒力基因,选择具有特异性的副溶血弧菌不耐热溶血毒素基因、金黄色葡萄球菌的耐热核酸酶基因、单核细胞增生性李斯特菌编码溶血素O基因、沙门氏菌侵袭蛋白A基因及志贺氏菌侵袭性质粒抗原H基因,设计5对特异性引物进行多重PCR检测,对反应条件进行优化并评价了其特异性和灵敏度。通过对48份实际样品检测,验证了此多重PCR体系具有很好的可靠性和实用性。
- 程晓艳刘庆慧黄倢
- 关键词：多重PCR食源性病原菌
