国家科技支撑计划(2012BAK17B10) 作品数:30 被引量:159 H指数:8 相关作者: 薛峰 朱国强 蒋原 孟霞 厚华艳 更多>> 相关机构: 江苏出入境检验检疫局 扬州大学 深圳市易瑞生物技术有限公司 更多>> 发文基金: 国家科技支撑计划 国家自然科学基金 国家高技术研究发展计划 更多>> 相关领域: 农业科学 医药卫生 轻工技术与工程 理学 更多>>
肠炎沙门氏菌SEF14菌毛体外表达条件研究 2013年 为筛选肠炎沙门氏菌(S.enteritidis)SEF14菌毛体外表达的最适培养条件,本研究对4种不同培养条件下S.enteritidis SEF14菌毛的体外表达情况进行了比较研究,并通过RT-PCR、透射电镜与免疫电镜观察和SDS-PAGE等方法进行验证。研究表明,其中以TSB肉汤25℃震荡培养24 h后转接20℃继续震荡培养24 h,最后转接粘附因子抗原培养基(CFA)(pH6.0)于37℃静置培养50 h^60 h的SEF14菌毛表达量最高。RT-PCR结果显示在该培养条件下SEF14菌毛主要亚单位蛋白编码基因sefA mRNA表达水平最高,在透射电镜和免疫电镜下均可观察到丰富的SEF14菌毛。SDS-PAGE结果显示,所抽提的菌毛蛋白大小为14.3 ku,与相关报道一致,而且等量菌泥的抽提量最大。 朱春红 段晓丽 厚华艳 龚建森 张江英 姚丰华 孟霞 朱国强关键词:肠炎沙门氏菌 RT-PCR 电镜观察 沙门氏菌菌毛研究进展 被引量:13 2013年 基因组生物信息分析表明沙门氏菌同时含有多种菌毛操纵子基因序列,在不同血清型沙门氏菌中具有多样性分布特征,很可能是不同血清型沙门氏菌在不同环境下的进化结果。本文就沙门氏菌菌毛操纵子编码基因的分类,菌毛分子结构特征及不同菌毛在遗传进化、致病性、传染性中发挥的作用做简要综述。 朱春红 孟霞 厚华艳 龚建森 张江英 朱国强关键词:沙门氏菌 生物学特性 C18-磁性纳米颗粒萃取虾肉中氯霉素残留 被引量:3 2012年 建立了一种用C18键合磁珠固相萃取虾肉中氯霉素残留的方法。在Fe3O4超顺磁性纳米颗粒的表面键合C18基团,制备双功能反相萃取颗粒。用该颗粒对样品中的氯霉素残留进行固相萃取,对结合时间、温度、磁珠用量等因素进行了优化,建立磁珠法兽药残留固相萃取方法。用标准方法(SN/T 1864-2007)对萃取所得产物进行检测。经过优化,C18键合磁珠的最佳萃取条件为50℃结合5 min,用1 mL甲醇洗脱3次。检测结果显示该方法具有良好的精密度和回收率。在0.1~10μg/kg之间具有良好的线性关系,相关系数为0.9941,检出限为0.1μg/kg。该方法灵敏度高、重现性好、准确度高,可满足虾肉中氯霉素残留检测的需要。 王西丽 陈巧燕 李金峰 李颖 薛峰 蒋原 朱海关键词:固相萃取 氯霉素 Determination of Sulfadimidine in Royal Jelly by C_(18)-functionalized Magnetic Silica Nanoparticles Solid Phase Extraction-High Performance Liquid Chromatography-Tandem Mass Spectrometry 2012年 [Objective] This study aimed to develop a method of C_18-functionalized magnetic silica nanoparticles solid phase extraction-high performance liquid chro- matography-tandem mass spectrometry for the determination of sulfadimidine in royal jelly. [Method] The royal jelly samples were pretreated by MCX SPE column and C_18-functionalized magnetic silica nanoparticles, and the purified samples were de- tected by HPLC-MS/MS. [Result] The detection method showed a good linear rela- tionship in the range of 5-80 ugkg (r=0.993 1). The recovery ranges were between 93%- 104% with the relative standard deviations (RSD) below 11.3%. [Conclusion] Combined with automation equipment, the method is simple, fast, time-saving, and easy to real- ize the automation of sulfadimidine in the royal jelly samples before determination. 李金峰 李颖 蒋原 薛峰 戴劲 朱海风疹IgM抗体荧光免疫层析法的建立 2013年 目的建立了检测血清中风疹病毒IgM抗体的荧光免疫层析法。方法通过对风疹病毒包膜蛋白E1与荧光颗粒偶联条件、质控线包被条件、检测线包被条件的优化,成功建立了风疹IgM抗体荧光免疫层析法。结果以ELISA为参考,该方法的灵敏性、特异性和符合率分别为77.2%、82.3%、79.3%,其中灵敏性和符合率两项指标均优于胶体金免疫层析法,特异性与胶体金免疫层析法相当。结论本研究建立的检测风疹IgM抗体的荧光免疫层析法,具有简便、快速、灵敏度高的特点,克服了目前风疹病毒IgM检测中存在的操作繁琐、检测时间长、检测费用高的缺点,有潜在的应用价值。 俞慕华 王匀 袁梦 朱海 赵芳 林季敏关键词:风疹 IGM 进出口食品中不同血清型沙门氏菌PFGE和MLST分型比较研究 被引量:24 2014年 目的通过脉冲场凝胶电泳(PFGE)和多位点序列分型(MLST)两种方法对进出口食品中不同血清型沙门氏菌的分辨力和应用价值进行了比较研究。方法采用PFGE和MLST两种方法对进出口食品中分离得到的鼠伤寒及肠炎两种血清型共30株沙门氏菌进行分型研究。结果两种血清型共30株沙门氏菌经PFGE分型可得到23种型别,DI值为0.9563;鼠伤寒和肠炎两种血清型菌分别经PFGE分型,DI值分别为1.000和0.9048。MLST对30株沙门氏菌分型得到4种ST型,DI值为0.5793;鼠伤寒和肠炎两种血清型菌分别经MLST分型,DI值分别为0.2571和0.1333。结论 在分辨力方面,PFGE更适合于同一沙门氏菌血清型的分型,MLST则适合于不同沙门氏菌血清型间的分型。MLST在替代、补充血清型分型方面有潜在的优势,PFGE在溯源研究方面更胜一筹。 刘慧玲 万志刚 洪小柳 谢丹妮 黄李华 赵芳 薛峰 蒋源 吕敬章关键词:食品 鼠伤寒沙门氏菌 肠炎沙门氏菌 脉冲场凝胶电泳 多位点序列分型 心理应激对犬认知的影响 2015年 美国心理学家R.S.Lazarus等[1]把心理应激概括为个体对外界环境有害物、威胁、挑战认知和评价后所产生的心理生理行为反应。适宜的心理应激刺激可使身体更好地适应环境变化,提高适应能力,改善认知功能,有利于动物维持稳定的健康状态[2]。长期的过度紧张和焦虑意味着这种努力的适应需要大量能量,从而损害其他重要生理功能,导致学习记忆能力下降、认知功能改变,以及行为异常[3]。 孙明亮 王威 包军关键词:心理应激 学习记忆能力 生理功能 心理学家 环境变化 河南省4家大型屠宰场中预冷后肉鸡胴体沙门菌污染水平及耐药状况分析 被引量:6 2018年 目的分析河南省4家大型屠宰场中预冷后肉鸡胴体沙门菌污染水平及耐药状况。方法以河南省4家屠宰量为15 000~50 000羽/日的大型屠宰场为采样点,共采集269份预冷后肉鸡胴体进行沙门菌污染检测,对样品中沙门菌进行检测和分离,采用微量半同体氯化镁孔雀绿最可能数(MPN)法对样品中沙门菌进行定量检验,采用微量肉汤稀释法测定分离株对8种抗生素的最低抑菌浓度(MIC),并进行药敏试验。结果共分离出沙门菌131株,污染率为48.7%,平均污染水平为1.32 MPN/g。131株沙门菌共检出8种血清型,其中肠炎沙门菌最多,为93株(71.0%),其次为印第安纳沙门菌21株(16.0%)。只有2株肠炎沙门菌(1.5%)对所有测试的抗生素敏感,其余129菌株对8种抗生素均有不同程度的耐药,其中对奈啶酸(NAL)的耐药率最高,为79.4%(104株),多重耐药菌株为51株(38.9%)。结论河南省4家大型屠宰场中预冷后肉鸡胴体沙门菌污染率较高,污染水平较为严重,血清型复杂。 白莉 李薇薇 韩海红 刘继开 付萍 张秀丽 郭云昌关键词:沙门菌感染 耐药分析 屠宰场 C_(18)键合磁珠固相萃取-液质联用检测蜂王浆中磺胺二甲嘧啶残留 被引量:4 2012年 [目的]建立一种应用C18键合磁珠固相萃取-液质联用检测蜂王浆中磺胺二甲嘧啶残留的方法。[方法]MCX固相萃取小柱联合C18磁珠对蜂王浆进行前处理,用HPLC-串联质谱仪对净化后样本进行检测。[结果]该方法的线性范围是5~80μg/kg,相关系数0.993 1。添加水平为5、10、20μg/kg时各种化合物的平均回收率范围为93%~104%,RSD值均不大于11.3%。[结论]该方法简单、快速,结合自动化设备,可实现蜂王浆样品中磺胺二甲嘧啶测定前处理的自动化。 李金峰 李颖 蒋原 薛峰 朱海关键词:固相萃取 磁珠 磺胺二甲嘧啶 超高效液相色谱-串联质谱 肠炎沙门菌Ⅰ型菌毛主要亚单位FimA原核表达及纯化 被引量:2 2014年 为探讨肠炎沙门菌非编码小RNA(non-coding small RNA)IsrE在转录后水平是否参与对fimA的调控作用,在大肠杆菌中构建并表达FimA重组蛋白,并对其培养条件进行优化,制备高纯度FimA重组蛋白。利用原核表达载体p ET-28a(+)构建出能表达fimA的重组质粒,并分别对IPTG浓度、诱导温度和诱导时间等条件进行优化,以提高目的蛋白的产量和增大其可溶性,最后经Ni-NTA亲和层析分离纯化FimA重组蛋白。通过酶切、测序和Western blot鉴定分析,成功构建并表达肠炎沙门菌I型菌毛主要亚单位FimA,蛋白分子质量约为19.3 kDa,且主要以包涵体的形式表达,经Ni-NTA亲和层析纯化后的重组蛋白在SDS-PAGE中显示单一条带。本研究构建、表达并获得纯度较高的重组蛋白FimA,为进一步研究和验证肠炎沙门菌非编码sRNA IsrE是否在转录后水平参与对fimA的调控奠定了基础。 王勇祥 孟霞 段进坤 周明旭 周明旭 杨溢 陶洁关键词:肠炎沙门菌 ISRE 原核表达