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乙型肝炎病毒X蛋白及其截短体与损伤DNA结合蛋白1在HBV复制中的作用被引量：1: 2013年; 目的探讨乙型肝炎病毒x蛋白（HBx）及其两个截短体（HBx、HBx43～154）与损伤DNA结合蛋白（DDB）1在HBV复制中的作用。方法用质粒瞬时转染HepG2细胞，72h后分别提取细胞总蛋白质和总RNA，通过Westernblot分析验证DDB1蛋白表达，逆转录实时定量PCR在基因的mRNA水平观察HBx蛋白及其截短体对DDB1蛋白表达的影响。提取转染72h后细胞胞质DNA，收集细胞的培养上清液，通过实时定量PCR及酶联免疫吸附试验检测各组细胞胞质HBVDNA复制及培养上清液中病毒标志物HBsAg、HBeAg表达水平，从而观察HBx蛋白及其两个截短体与DDB1对HBV复制的影响。对数据进行单因素方差分析及检验。结果在有HBV复制的HepG2细胞中，缺失HBx转染组细胞中DDB1蛋白在mRNA水平明显下降（相对表达水平为野生型转染组的52．74％±8．95％，f=9．143，P〈0．05），胞质DNA的复制及培养上清液中病毒标志物HBsAg、HBeAg表达水平也明显下降（相对表达水平分别为野生型转染组的55．49％±1．19％、48．05％±2．90％、46．22％±2．20％，P值均〈0．05）。共转染HBxN-端截短体HBx4。后细胞中DDB1蛋白mRNA水平恢复到野生型水平，且能使缺失HBx蛋白的HepG2细胞中胞质HBVDNA的复制及培养上清液中病毒标志物HBsAg、HBeAg的表达恢复到野生型水平。但共转染HBxC-端截短体HBx的细胞中DDB1蛋白在mRNA水平较野生组明显下降（相对表达水平为野生型转染组的59．95％±9．09％，f=7．629，P〈0．05），且不能使转染缺失HBx蛋白的HepG2细胞中胞质HBVDNA的复制及培养上清液中病毒标志物HBsAg、HBeAg的表达恢复到野生型水平（相对表达水平分别为野生型转染组的62．53％±0．67％、63．13％±2．14／0、55．40％±0．99％，P值均〈0．05）。并且各转染组DDB1蛋白mRNA水平变化与胞质HBVDNA复制和培养上清液中病毒标志物HBsAg、HBeAg表达水平是一致的。结论C-�; 杨旋何松罗娜罗莉樊浩龚倩; 关键词：肝炎病毒乙型乙型

乙型肝炎病毒Ⅹ蛋白对原代小鼠肝细胞周期的影响被引量：2: 2012年; 目的探讨HBV复制过程中HBx蛋白对原代小鼠肝细胞周期的影响。方法采用原代小鼠肝细胞为研究系统，用野生型HBV质粒（pHBV）和HBx蛋白表达缺失的HBV质粒（pHBV△X）分别转染细胞。Westernblot检测细胞周期蛋白cyclinD1、cyclin E、cyclinA及细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子p16（p16）、p21的表达水平l实时荧光定量PCR和Southernblot检测HBVDNA复制水平。两组之间比较用两样本均数f检验，多样本均数间的比较用方差分析及q检验。结果新分离肝细胞和原代培养24、48、72h肝细胞的细胞周期蛋白表达水平无明显差异；转染48h后，pHBV组细胞与pHBV△X组细胞周期蛋白条带灰度值相比，前者cyclinD1、p21、cyclinE表达量较高，p16的表达量较低，统计量t值分别为15．713，22．897，14．680，-19．584，P值均〈0．05。培养72h后提取HBVDNA，Southernblot检测HBVDNA复制中间体松散环状DNA、双链线性DNA、单链DNA的水平，经条带灰度扫描，pHBV组的水平（分别为3288．336±448．011、6458．318±182．163、2760．613±393．561）明显高于pHBV△X组（分别为515．721±62．530、2122．228±28．347、1632．013±207．021）及空白对照组，P值均〈0．05 实时荧光定量PCR检测HBVDNA复制水平，pHBV组【每个细胞（987．50±47．80）拷贝】也明显高于pHBVAX组【每个细胞（303．67±33．94）拷贝】，t=20．203，P〈0．05。结论HBx蛋白能通过调节细胞周期中各蛋白的表达，使细胞由静止期（G0）进入DNA合成前期（G1）并停滞于G1期，从而促进HBV的复制。; 蔡园何松罗娜罗莉龚倩; 关键词：肝炎病毒乙型转染小鼠细胞周期蛋白质类 HBX蛋白

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重庆市卫生局医学科研项目(2010-1-37)

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