国家自然科学基金(81372284)
- 作品数：2 被引量：2H指数：1
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- 新型核心蛋白聚糖靶向性重组腺相关病毒的制备与鉴定被引量：2
- 2014年
- 核心蛋白聚糖(decorin,DCN)是广泛存在于细胞基质中的一种富含亮氨酸的蛋白多糖,属于蛋白聚糖家族中的小分子类.DCN可作为多种细胞因子的配体,发挥多种生物学功能.DCN在一些肿瘤组织中高水平表达,调控恶性肿瘤的生长和迁移.腺相关病毒(AAV)是肿瘤基因治疗中常用的基因工程载体,利用重组技术可以实现对病毒衣壳蛋白的改造,使其感染具有靶向性.而针对DCN高表达细胞的转导可能成为肿瘤基因治疗应用中定向导入治疗基因的有效策略.本研究在对多种DCN结合蛋白序列保守区的分析基础上,筛选出具有较高活性的DCN结合功能域(DB1),并将其融合至AAV衣壳蛋白VP2编码序列的N端;继而利用AAV的嵌合包装技术,成功制备了衣壳展示DB1表位的重组AAV.在过表达DCN细胞的感染实验中,该病毒表现出针对DCN较强的靶向性.本研究所制备的DCN靶向性腺相关病毒不仅为肿瘤治疗的应用提供了一种新型载体,同时可作为一类特殊的基因导入工具为研究DCN在肿瘤发生发展中的作用提供帮助.
- 周子玉姚婷张晨光丁卫
- 关键词：核心蛋白聚糖基因治疗
- 基因编码钙指示剂在药物反应性细胞核钙信号实时动态检测中的应用
- 2018年
- 目的探讨新型基因编码钙指示剂(genetically-encoded calcium indicators,Ge CIs)在药物反应性细胞核钙信号实时动态检测中的应用。方法将常用的Ge CI变体——GCa MP6s用核定位序列(nuclear localization sequence,NLS)标记以用于细胞核钙的检测;同时在其C端与红色荧光蛋白td Tomato融合作为分子内的定量参照。将构建的质粒分别转染至He La细胞和U87MG细胞中,利用活细胞共聚焦显微成像技术对核钙信号的实时变化进行动态监测。结果蕈青霉素(Paxilline)能够引起在40 min连续记录中核钙水平的持续增加,并且增加的动力学模式在不同的细胞系中差异存在统计学意义;同时在药物处理后细胞反应的筛选中显示,青蒿素可以引起细胞核钙浓度的明显改变,其变化的幅度与持续情况与蕈青霉素及过氧化氢的作用有所不同。此外,笔者还发现利用核钙的变化指标可以对细胞在接受应激性刺激后的异质性表现进行统计聚类分析。结论在非兴奋细胞中,不同药物刺激可以引起细胞核钙离子浓度的升高。
- 龚明涛张晨光丁卫
- 关键词：青蒿素
