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抗鸡β干扰素单克隆抗体的制备及初步鉴定被引量：1: 2013年; 以鸡β干扰素(IFN-β)的重组蛋白pCold-ChIFN-β免疫8周龄Balb/c小鼠,采用杂交瘤技术制备抗鸡β干扰素单克隆抗体,获得两株抗鸡IFN-β的单克隆抗体。经ELISA鉴定,两株单抗的腹水效价均达到10-3以上;Western blot检测结果证明2株单克隆抗体均能与表达的鸡IFN-β发生特异性反应;其中一株单抗可检测浓度小于15 pg/mL的鸡IFN-β。本研究为检测鸡IFN-β提供了一种重要工具,也为评价鸡用疫苗的免疫效果等奠定了物质基础。; 张向乐孟春春仇旭升谭磊宋翠萍丁铲; 关键词：原核表达单克隆抗体

新城疫病毒La Sota C5株感染性克隆的构建及病毒拯救被引量：1: 2013年; 将本实验室保存的一株La Sota病毒用有限稀释法接种鸡胚进行纯化,连续传代5次后筛选到1株高血凝效价的纯培养克隆株,命名为La Sota C5,并对其进行全基因组测序,克隆株与亲本株在生物学特性与基因序列上都存在一定的差异。参照La Sota C5株全基因序列单酶切位点,用RT-PCR的方法将基因组分8段扩增,按照病毒基因组的结构顺序,将克隆片段定向插入到TVT转录载体中,成功构建含有病毒全长cDNA的转录载体TVT-La Sota C5。将TVT-La Sota C5与辅助质粒pCI-NP、pCI-P和pCI-L共转染BSR-T7/5细胞,成功拯救出了具有感染性的La Sota株新城疫病毒。病毒的成功拯救为后续基因功能和疫苗载体开发等方面的研究提供了平台。; 汪军卿张向乐孟春春仇旭升孙英杰谭磊宋翠萍丁铲; 关键词：新城疫病毒 LA SOTA 感染性克隆病毒拯救

新城疫P蛋白磷酸化位点的质谱分析和功能鉴定被引量：1: 2019年; 副黏病毒磷蛋白,即P蛋白(phosphoprotein),富含丝氨酸和苏氨酸,在自然条件下磷酸化水平较高。副黏病毒P蛋白的磷酸化对病毒的转录和复制具有重要的作用,但新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)P蛋白磷酸化位点及其功能依然尚不明确。本研究通过LC-MS/MS质谱对NDV La Sota病毒P蛋白的磷酸化位点进行了检测,鉴定了Ser56、Ser77、Thr78、Thr82、Ser164和Ser141六个磷酸化位点。通过在线分析,预测这些磷酸化位点的磷酸化激酶分别是PKC、CKII和GSK3。为了鉴定6个磷酸化位点的生物学功能,在已建立的表达GFP基因的NDV微型基因组质粒pTVT-LGT基础上,用荧光素酶报告基因(luciferase)替换GFP报告基因,建立了表达荧光素酶的NDV微型基因组系统。利用“丙氨酸扫描”对6个磷酸化位点进行突变后,在NDV微型基因组平台中进行功能鉴定。结果显示,T78、T82和S164位磷酸化位点的缺失显著影响了病毒RNA依赖性RNA聚合酶复合体(RNA dependent RNA polymerase,RdRp)的复制,其生物学意义有待进一步的研究。; 李继红徐腾飞张耀丹汪伟孟春春孙英杰谭磊宋翠萍廖瑛仇旭升丁铲; 关键词：新城疫病毒质谱磷酸化位点

鸡APOBEC4稳定表达细胞系的建立与应用: 2022年; 鸡APOBEC4是最新发现的载脂蛋白B mRNA编辑酶(APOBEC)家族成员,功能尚不明确。由于具有保守的胞苷脱氨酶基序,该家族蛋白能够诱导机体DNA或RNA发生广泛的胞嘧啶脱氨基突变,参与到机体免疫过程中去,在机体先天性免疫与适应性免疫中均发挥重要作用。这种RNA编辑作用亦可诱导病毒基因组突变,产生种类众多的突变株,但由于每种突变在群体中的比例极小,自然状态下会被优势准种掩盖难以检测,因此需要能够稳定表达该蛋白的细胞系作为模型进行研究。本实验室前期结果表明,鸡源APOBEC4主要在免疫细胞中表达,而传染性支气管炎病毒、流感病毒感染能够显著刺激鸡APOBEC4的大幅上调。为研究鸡APOBEC4编辑作用对病毒复制的影响,本研究利用慢病毒包装方法,将鸡源APOBEC4基因导入BHK21细胞,通过Real-time quantitative PCR和Western blot方法进行鉴定,得到能够稳定表达鸡APOBEC4的BHK21细胞系BHK21-APOBEC4,并发现鸡传染性支气管炎病毒(IBV)Beaudette株和禽流感病毒(AIV)H9N2株在该细胞系上的复制较对照组受到显著抑制,为进一步研究APOBEC4的生物学功能奠定基础。; 石梦雨张耀丹孟春春孙英杰谭磊宋翠萍刘炜玮廖瑛仇旭升丁铲; 关键词：抗病毒作用

利用PiggyBac转座系统构建稳定表达鹅RIG-I的DF-1细胞系被引量：4: 2014年; 维甲酸诱导基因-I(retinoic acid inducible gene-I,RIG-I)是最近几年发现的一种细胞内模式识别受体,能够特异性的识别并结合病毒RNA,进而发挥抗病毒效应。RIG-I在进化中相对保守,但已有报道和我们的前期研究显示:家禽中鸭和鹅体内均有RIG-I受体,但鸡却缺乏RIG-I受体。为了研究这种天然缺失对鸡是否有不利影响,本研究利用PiggyBac转座系统将鹅源RIG-I转染入鸡胚成纤维细胞系DF-1,两次亚克隆后获得单个克隆,以荧光、RT-PCR及Western blot进行鉴定,最终获得稳定表达鹅RIG-I的DF-1细胞系,为进一步研究鸡的先天性免疫机制和鹅RIG-I的功能打下基础。; 胡跃孙英杰王晓旭仇旭升宋翠萍谭磊胡桂学丁铲

Identification and functional analysis of phosphorylation in Newcastle disease virus phosphoprotein: <正>Newcastle disease virus(NDV)encodes a highly phosphorylated P protein;however,the phosphorylation sites hav...; 仇旭升Yuan ZhanChunchun MengJunqing WangLuNa DongYingjie SunLei TanCuiping SongShengqing Yu丁铲

副黏病毒V蛋白阻断干扰素信号通路的分子机制研究进展: 2013年; 副黏病毒V蛋白是由其P基因编码的一种非结构蛋白,能够阻断IFN信号通路,拮抗IFN的抗病毒效应,通常认为是病毒毒力因子之一。在副黏病毒感染过程中,V蛋白靶向性地与IFN信号通路JAK-STAT途径中关键信号转导与转录活化因子(signal transducer and activator of transcription,STAT)蛋白相互作用,从而发挥拮抗IFN下游信号的功能。不同副黏病毒V蛋白与STAT作用机制也不尽相同。本文对副黏病毒V蛋白产生,IFN信号通路及不同副黏病毒拮抗IFN信号分子机制做一概述。; 傅强仇旭升陈素娟彭大新丁铲; 关键词：副黏病毒 STAT

新城疫病毒M蛋白通过自身核定位信号介导进入宿主细胞核被引量：4: 2014年; 通过生物信息学方法预测了新城疫病毒(NDV)基质蛋白(M)的细胞核定位信号(NLS),用Overlap-PCR方法缺失NLS基因,分别构建M和M-ΔNLS EGFP重组质粒,转染单层鸡胚成纤维细胞(DF-1),激光共聚焦观察了M蛋白亚细胞定位。结果表明:M蛋白能进入宿主细胞核中,缺失NLS基因序列之后M蛋白只分布于细胞质中。结论:新城疫病毒M蛋白可以通过其核定位信号进入宿主细胞核。; 段云兵汪军卿仇旭升谭磊丁铲张源淑; 关键词：新城疫病毒 M蛋白亚细胞定位核定位信号

HeLa细胞中泛素蛋白酶体系统对新城疫病毒复制的影响被引量：4: 2014年; 本文主要对细胞的泛素-蛋白酶体系统是否参与新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)的复制过程进行了研究。用NDV感染HeLa细胞,对细胞样品进行Western blot实验,并检测细胞26S蛋白酶体的三种蛋白水解活性变化。同时使用多种泛素-蛋白酶体系统相关的抑制剂处理细胞并做NDV感染,测定细胞上清中病毒TCID50值,比较药物处理与DMSO处理对病毒增殖的影响。结果表明,HeLa细胞在感染NDV后,细胞内泛素化蛋白水平降低,而26S蛋白酶体的三种蛋白水解活性都显著升高;使用泛素-蛋白酶体系统抑制剂后NDV的增殖受到了明显的抑制,证明NDV在HeLa细胞内的增殖与细胞自身的泛素-蛋白酶体系统关系密切。; 曲昱蓉詹媛仇旭升谭磊孙英杰宋翠萍丁铲; 关键词：新城疫病毒泛素-蛋白酶体系统蛋白酶体抑制剂

新城疫病毒ClassⅠ强毒株L基因的表达及单克隆抗体的制备被引量：1: 2012年; 采用RT-PCR方法从新城疫病毒(NDV)ClassⅠ强毒株9a5b中扩增出了L基因C末端的基因片段,将其克隆到表达载体pGEX-6P-1中,测序验证后转化入表达宿主菌BL21进行IPTG诱导表达,表达的蛋白接种8周龄BALB/c小鼠,制备L蛋白的单克隆抗体,用间接免疫荧光试验(IFA)、酶联免疫吸附试验(ELISA)和Western-bolt方法共同检测所获得的抗体。结果显示,重组菌可表达出分子质量约为39ku的重组融合蛋白。SDS-PAGE分析显示,表达的蛋白以包涵体的形式存在于菌体中。多种方法筛选显示成功制备了4株单克隆抗体。免疫特异性鉴定结果表明,在所获得的单抗中,4株单抗均具有ELISA和IFA效价,且4株单抗与ClassⅠ毒株的反应均强于与ClassⅡ毒株的反应。; 韦娜娜于洋陈鸿军仇旭升于圣青宋翠萍谭磊任涛丁铲; 关键词：新城疫病毒原核表达单克隆抗体 L蛋白杂交瘤细胞

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