国家现代农业产业技术体系建设项目(nyhytx-40-3)
- 作品数：2 被引量：14H指数：2
- 相关作者：毛立窦永喜才学鹏翟军军巩伟更多>>
- 相关机构：中国农业科学院兰州兽医研究所新疆农业大学更多>>
- 发文基金：国家现代农业产业技术体系建设项目公益性行业(农业)科研专项更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 小反刍兽疫病毒P蛋白的表达、纯化及抗体的制备及初步应用被引量：2
- 2010年
- 本文旨在对小反刍兽疫病毒P蛋白进行原核表达,并利用表达的蛋白制备抗血清,然后用于间接免疫荧光检测。将构建好的pET-30a(+)-P重组表达质粒转化大肠杆菌构建P蛋白的原核表达体系。重组菌经IPTG诱导,用SDS-PAGE电泳检测融合蛋白得到了表达。通过对表达条件的优化,确定了P蛋白在28℃、IPTG诱导浓度为0.2 mmol.μL-1的条件下诱导6 h,可溶性P蛋白表达量最高。利用镍柱亲和层析法纯化可溶性的P蛋白,然后以纯化的蛋白为抗原免疫小鼠,制备了多克隆抗体,其滴度最高可达1∶25 600,而且特异性好,表明获得了P蛋白的多克隆抗体。同时利用所制备的抗体对pcDNA3.1/P真核表达进行了间接免疫荧光检测。P蛋白在大肠杆菌中得到了高效表达,并制备了特异性好、滴度高的抗血清,为研究P蛋白功能奠定了基础。
- 翟军军窦永喜张海瑞毛立蒙学莲王秋霞骆学农才学鹏
- 关键词：PPRV纯化抗体制备
- 小反刍兽疫病毒RT-PCR检测方法的建立被引量：12
- 2010年
- 通过分析小反刍兽疫病毒(PPRV)不同毒株的N基因序列,根据N基因保守区序列设计了1对引物,根据肌动蛋白基因序列设计了另1对引物作为内参,建立了小反刍兽疫RT-PCR诊断方法,预期扩增片段分别为687bp和493bp。以PPRVNigeria75/1株RNA和山羊组织总RNA混合物为模板,在RT-PCR反应体系内同时加入绵羊肌动蛋白基因引物和PPRVN基因引物,结果可扩增出2条目的条带,序列测定结果证实,分别扩增出了目的基因。对RT-PCR反应条件进行了优化,在最佳反应条件下,该RT-PCR最低可检测到12TCID50/mL的病毒RNA。用该方法对人工感染PPRVNigeria75/1株山羊的血液样品进行检测,结果可扩增出目的基因片段。表明建立的RT-PCR方法具有较好的特异性、敏感性和准确性。
- 毛立窦永喜翟军军王玉朝巩伟才学鹏
- 关键词：小反刍兽疫病毒反转录聚合酶链反应
