广西壮族自治区自然科学基金(0992032-12)
- 作品数：2 被引量：10H指数：2
- 相关作者：钟艳平李力黎丹戎林若芸何冰更多>>
- 相关机构：广西医科大学广西医科大学附属肿瘤医院广西壮族自治区人民医院更多>>
- 发文基金：广西壮族自治区自然科学基金广西研究生教育创新计划更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 实时PCR检测单细胞中人端粒酶hTERT基因mRNA的表达被引量：6
- 2013年
- 人端粒酶逆转录酶基因(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)的表达与端粒酶活性密切相关,而多项研究表明,端粒酶在肿瘤发生、发展、细胞永生化方面起重要作用.为探讨单细胞技术检测卵巢癌SKOV3细胞转导hTERT前后其mRNA表达的差异,前期已通过慢病毒转染,将携带hTERT基因的表达质粒载体LV4-pGLV-EF1a-EGFP-hTERT转入卵巢癌SKOV3细胞系,构建了稳定表达hTERT蛋白的细胞株(SKOV3 h),同时设空载体感染组(SKOV3 b)和未处理组(SKOV3)为对照组,采用流式细胞术,分选不同数量的细胞进行实时PCR.结果显示,初步摸索的细胞数在50个以内,且随着细胞数目的增多,Ct值逐渐增大(P<0.05);SKOV3 h组hTERT基因mRNA表达最高,SKOV3 b组次之,SKOV3组表达最低(P<0.05).提示SKOV3细胞转导hTERT基因后可促进该基因的mRNA表达.同时用该法检测了单个卵裂球内hTERT基因的表达,为利用单细胞单基因遗传学诊断研究及肿瘤学研究提供基础.
- 李楠黄莉何冰钟艳平林若芸李力薛林涛王世凯黎丹戎
- 关键词：单细胞实时PCR
- 过表达人端粒酶逆转录酶促进人脐静脉血管内皮细胞增殖被引量：4
- 2011年
- 人端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)是端粒酶的催化亚基,专司在染色体末端添加端粒重复序列,与维持端粒长度与功能有关.为探索hTERT的生物学功能,本研究以人脐静脉血管内皮细胞(hUVEC)为研究对象,观察了hTERT基因过表达对hUVEC细胞增殖作用和端粒酶活性的影响.利用构建的pEGFP-C1-hTERT融合基因表达载体转染hUVEC,结果显示,转染后的细胞可见GFP表达,提示转染细胞有GFP-hTERT融合蛋白表达.RT-PCR、免疫组化和TRAP-PCR-ELISA法显示,与未转染细胞比较,转染细胞的hTERT mRNA、蛋白质表达水平明显升高,端粒酶活性明显增强.MTT实验显示,转染hTERT基因的细胞在72 h后细胞增殖速率明显大于未转染细胞及空载体转染细胞.结果提示,过表达hTERT基因可提高血管内皮细胞端粒酶的活性和增殖能力.实验结果证明,端粒酶活性与细胞增殖活性密切相关.
- 林若芸黎丹戎钟艳平王琪李力
- 关键词：人端粒酶逆转录酶真核表达载体人脐静脉血管内皮细胞
