郭书林 作品数:27 被引量:119 H指数:6 供职机构: 厦门出入境检验检疫局 更多>> 发文基金: 国家质检总局科技计划项目 国家质检公益性行业科研专项 国家科技支撑计划 更多>> 相关领域: 农业科学 医药卫生 轻工技术与工程 生物学 更多>>
奥尔森派琴虫和北海派琴虫ITS基因测序及同源性分析 2014年 通过设计能扩增奥尔森派琴虫和北海派琴虫ITS序列的特异性引物,对我国东南沿海8个地区养殖牡蛎中常见的两种派琴虫相应基因进行扩增、克隆和测序,并进行同源性分析。国内不同地区奥尔森派琴虫ITS序列的同源性超过99.3%,与国外分离株的同源性也在98.8%以上;种间同源性分析发现,奥尔森派琴虫与海水派琴虫和P.honshuensis的同源性较高,分别为94.2%和95.0%,与P.qugwadi的同源性最低,仅62.9%。深圳和三亚分离的北海派琴虫ITS序列有18个碱基存在差异,其中ITS-1有3个碱基差异,ITS-2有15个碱基差异,而5.8S高度保守,没有碱基差异;北海派琴虫与其他种类之间的差异主要表现在ITS-1和ITS-2区域;同源性比较发现,北海派琴虫的同源性在100%-97.9%之间,其中深圳北海派琴虫的同源性较低,为97.9%。种间同源性分析表明,北海派琴虫与奥尔森派琴虫的同源性较高,为89.4%,其次为海水派琴虫和P.honshuensis,与P.qugwadi同源性最低,仅71.9%。 郭书林 陈垚 陈信忠 龚艳清 杨俊萍关键词:ITS基因 同源性分析 3种牡蛎原虫的流行情况调查及多重PCR检测方法 被引量:3 2012年 应用聚合酶链式反应(PCR)方法对福建、广东和海南等地沿海的养殖牡蛎进行包拉米虫、派琴虫和单孢子虫检测.结果表明,这些地区的牡蛎均不同程度地感染这些原虫,经鉴定病原为牡蛎包拉米虫、奥尔森派琴虫和尼氏单孢子虫.根据基因库中奥尔森派琴虫和尼氏单孢子虫的基因序列设计多对特异性引物,检测包拉米虫的引物采用世界动物卫生组织推荐引物,通过对多重PCR反应条件的优化,建立可同时检测这3种原虫的多重PCR方法.运用该方法对样品中的牡蛎包拉米虫、奥尔森派琴虫和尼氏单孢子虫进行扩增,结果得到与试验设计相符的303、480和749 bp 3条特异性扩增条带,对其他贝类病原核酸的扩增均为阴性.多重PCR方法最低能检测到10 pg牡蛎包拉米虫、奥尔森派琴虫和尼氏单孢子虫DNA,表明该方法适用于这3种原虫的快速检测和鉴别诊断. 陈垚 陈信忠 郭书林PCR-RFLP方法检测和鉴别五种李斯特菌 被引量:4 2013年 目的建立快速检测和鉴别单增李斯特菌、绵羊李斯特菌、英诺克李斯特菌、威尔李斯特菌和格氏李斯特菌等5种常见李斯特菌的方法。方法采用PCR-RFLP技术,首先通过引物"Lis1A-Lis1B"对李斯特菌属iap基因进行扩增,扩增产物大小约1.4kb,然后用限制性内切酶DdeⅠ对PCR产物进行酶切,电泳观察具有种间特异性的酶切谱带进行鉴别。结果上述5种李斯特菌的PCR扩增产物经内切酶DdeⅠ消化后,得到片段大小不同、具有种间差异的特异性酶切图谱。结论本实验建立的PCR-RFLP方法可以用于上述5种常见李斯特菌的快速检测和鉴定。 郭书林 陈信忠 龚艳清 杨俊萍 叶妍妍 孔繁德关键词:李斯特菌 应用免疫金标试纸开展种猪群猪瘟净化 2012年 猪瘟是一种急性、烈性、毁灭性、病毒性传染病。近年来随着免疫抑制性病毒病的流行,尤其是圆环病毒、蓝耳病毒对猪群造成很大的威胁,病毒抑制了猪机体的免疫器官功能,造成猪只注射了猪瘟疫苗产生不了对应性的免疫抗体,造成猪瘟的暴发和流行。从最近厦门地区许多猪场求诊的病例分析,大多数猪群都因感染了圆环病毒、蓝耳病毒,也最终暴发猪瘟死亡,损失严重。但是,如果猪群有较高水平的猪瘟抗体,即便感染了蓝耳病毒、圆环病毒,其死亡率也会大大降低。 郭书林 龚艳清 黄印尧关键词:猪瘟疫苗 种猪群 病毒性传染病 圆环病毒 蓝耳病毒 MALDI-TOF-MS方法检测、鉴定副溶血性弧菌 被引量:11 2013年 目的建立快速检测和鉴定副溶血性弧菌的基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)分析方法。方法采用副溶血性弧菌标准菌株,在不同的培养基或不同的培养时间下进行MALDI-TOF-MS检测,同时对长时间冷冻保存的菌株进行检测,以验证该方法的稳定性和重复性。对不同来源的菌株进行检测,以确认方法的准确性。结果用PW、TCBS琼脂和弧菌显色培养基等3种培养基,分别培养18、42、72h时,对该菌的蛋白质谱图影响很小;保存2年的菌株,其MALDI-TOF-MS鉴定分值保持稳定;对来自不同国家和地区的菌株都可以得到同样准确的结果。结论 MALDI-TOF-MS方法可以快速、准确地鉴定副溶血性弧菌。因其具有很好的稳定性和重复性,可用于副溶血性弧菌的日常检测。 龚艳清 陈信忠 郭书林 杨俊萍 叶妍妍关键词:MALDI-TOF-MS 副溶血性弧菌 基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱在李斯特菌检测和鉴定中的应用 被引量:17 2012年 为建立食品中各种李斯特菌的快速检测和鉴定方法,应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)对单增李斯特菌、绵羊李斯特菌、英诺克李斯特菌、威尔斯李斯特菌和格氏李斯特菌5种李斯特菌进行检测,并与传统的生化鉴定方法(VITEK 2)和聚合酶链式反应(PCR)方法检测结果进行比较;用不同培养基和不同培养时间培养的单增李斯特菌对该方法进行检测,还对60份人工感染5种李斯特菌的食品样品分别进行MALDI-TOF-MS、PCR以及传统生化方法的检测和鉴定。结果表明:MALDI-TOF-MS能够快速、可靠地区分上述5种李斯特菌,而且具有很好的稳定性和重复性,在检测时间、重复性和准确性方面的总体表现优于传统生化鉴定方法。MALDI-TOF-MS技术适用于对李斯特菌等食源性病原菌进行高通量、低成本的快速鉴定。 龚艳清 陈信忠 杨俊萍 郭书林 马群飞 石椿丽关键词:基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱 李斯特菌 MALDI-TOF-MS在病原微生物鉴定中的研究进展 被引量:29 2012年 基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)是鉴定多种致病性细菌的快速、可靠的方法,具有较好的稳定性和可重复性,在快速和准确性方面的总体表现明显好于传统的细菌生化鉴定方法。适合于一些致病菌的快速、高通量的检测和鉴定。综述MALDI-TOF-MS技术在普通病原菌、多血清型病原菌、非发酵性细菌,以及植物病原菌等病原微生物鉴定方面的最新研究进展。 陈信忠 龚艳清 郭书林关键词:微生物 克伦特罗的CLIA分析试剂盒的研制 2013年 通过制备克伦特罗(Clenbuterol,CL)人工抗原获得高活性抗体,用辣根过氧化物酶(HRP)标记CL抗原,以鲁米诺(luminol)为发光底物,建立直接竞争法检测分析盐酸克伦特罗,并对包被液、包被条件、封闭蛋白、孵育时间、酶用量等参数进行优化,成功研制出化学发光法检测CL试剂盒。该方法的线性检测范围0.1~8.1 ng·mL-1,线性相关系数r=0.996,IC50值为0.607 ng·mL-1;理论检测限小于0.1 ng·mL-1;批内变异系数6.76%~8.31%;批间变异系数7.4%;回收率(90±15)%,与莱克多巴胺等其他β-激动剂不发生交叉反应。 沈浩龙 张长弓 陈巧钦 江良振 庄晓勇 黄江山 郭书林 黄印尧关键词:盐酸克伦特罗 CLIA 试剂盒 金标试纸在猪场疫病防控上的应用 2012年 金标试纸具有微量、准确、快速、操作简便、结果直观、容易判定、成本低的优点,可作为疫苗质量的检测、抗体水平的普查、免疫程序的制定、疫病诊断和猪瘟净化的检测试剂。 林小英 沈育华 沈永栋 游根勇 郭书林 黄印尧关键词:疫病 多房棘球蚴线粒体NADH脱氢酶1基因分析及PCR检测方法 被引量:5 2012年 目的扩增多房棘球蚴线粒体NADH脱氢酶亚基1(NADH dehydrogenase suhunit1,ND1)基因全序列,测序并进行同源性比较。建立检测多房棘球蚴感染的PCR方法,应用于人和动物感染多房棘球蚴的快速检测和鉴定。方法根据多房棘球绦虫线粒体DNA全序列,设计引物扩增ND1基因并进行测序,获得多房棘球蚴ND1基因全序列。对该序列与其它常见棘球绦虫的NDI基因序列进行同源性分析。结果多房棘球蚴线粒体ND1基因序列与国外报告的多房棘球绦虫的同源性达到98.8%,与细粒棘球绦虫的同源性为86.2%,与少节棘球绦虫的同源性为84.6%,与伏氏棘球绦虫的同源性为87.0%。结论多房棘球蚴线粒体ND1基因与其他棘球绦虫相应基因存在显著差异。PCR方法可以用于多房棘球蚴感染的快速检测和鉴定。 杨俊萍 郭书林 陈信忠 龚艳清关键词:多房棘球蚴 PCR检测