王小元
- 作品数：39 被引量：117H指数：6
- 供职机构：江南大学生物工程学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学轻工技术与工程化学工程医药卫生更多>>
- 大肠杆菌PTS^(Ntr)相关基因缺失对L-苏氨酸合成的影响
- 2023年
- 大肠杆菌的氮磷酸转移酶系统(nitrogen phosphotransferase system,PTSNtr)在其工作过程中会消耗L-苏氨酸合成的前体物质磷酸烯醇式丙酮酸,敲除相关基因或可影响苏氨酸合成。作者利用CRISPR-Cas9系统,分别敲除PTSNtr相关基因ptsP、ptsO和ptsN,构建得到突变株MZ001、MZ002和MZ003。通过对出发菌株和突变菌株测定生长曲线,发现ptsP、ptsO和ptsN的单缺失使菌株培养前期生长迟缓,迟滞期延长,后期快速生长,稳定期生物量积累大于出发菌株。之后在出发菌株和突变菌株中引入含有苏氨酸合成的3个关键酶编码基因thrA*、thrB和thrC以及苏氨酸转运蛋白编码基因rhtC的表达质粒。对比菌株MG1655/pFW01-thrA*BC-rhtC,菌株MZ001/pFW01-thrA*BC-rhtC、MZ002/pFW01-thrA*BC-rhtC和MZ003/pFW01-thrA*BC-rhtC苏氨酸的产量有明显提高,分别为3.805、1.722、3.091 g/L,表明大肠杆菌的PTSNtr相关基因的敲除对提高其L-苏氨酸的合成能力有促进作用。
- 张淑嫣胡晓清李莹王小元
- 关键词：大肠杆菌L-苏氨酸
- 通过基因工程技术构建能合成特殊结构类脂A分子的大肠杆菌
- 类脂A是脂多糖(LPS)的疏水基团,大量存在于革兰氏阴性菌细胞外膜外层,可通过结合免疫细胞表面的TLR4受体来引发固有免疫应答(MyD88或TRIF途径),产生细胞因子.
- 韩亚宁李颜颜王小元
- 核心多糖结构变异对大肠杆菌自凝集特性的影响被引量：1
- 2017年
- 以大肠杆菌K-12菌株为研究对象,通过对比分析野生型W3110及脂多糖分子核心多糖结构变异菌株的自凝集特性,对细胞膜上核心多糖结构与细菌自凝集的相关性进行分析。结果表明,核心多糖的结构变异会增加大肠杆菌的自凝集能力,在4℃下静置12 h,突变菌株自凝集率较野生型菌株提高近3倍。以核心多糖缺失突变菌株ΔwaaC和外核心糖缺失突变菌株ΔwaaG为研究对象,进行菌株自凝集动力曲线测定。结果表明,在静置2 h后,菌株自凝集率均可达80%以上。通过对不同温度和不同菌液浓度下菌株自凝集特性的分析,温度与菌株的自凝集特性无明显相关性,而较高的菌液浓度能够提高菌株的自凝集能力。为分析突变菌株自凝集形成机制,以野生型W3110为对照,对突变菌株自转运蛋白编码基因flu进行RT-PCR分析,突变菌株中flu基因的转录水平增加2~4倍。同时,利用表达质粒pWSK29构建自转运蛋白质表达载体,通过诱导表达,确定自转运蛋白质在大肠杆菌W3110自凝集中的作用。
- 王洲李烨任格王小元
- 关键词：脂多糖细胞膜
- 革兰氏阴性细菌脂多糖分子Kdo_2-lipid A基团的结构修饰被引量：2
- 2013年
- 在大多数革兰氏阴性细菌中,脂多糖分子的Kdo2-lipid A基团是构成其外膜外层的主要成分。一些细菌通过修饰其脂多糖分子的Kdo2-lipid A基团来适应新的生存环境。Kdo2-lipid A在细胞内膜内层合成,被连上核心糖并翻转到内膜外层,再连上O-抗原重复单元,形成脂多糖分子。Kdo2-lipid A可以通过TLR4受体激活先天性免疫系统,所以其结构修饰机制的研究有助于开发新的细菌疫苗和疫苗佐剂。
- 王小元
- 关键词：脂多糖疫苗佐剂
- 大肠杆菌rfaD基因敲除突变菌株的LPS结构及其表型研究
- 本研究通过Red同源重组技术对大肠杆菌W3110进行了rfaD基因的敲除。实验结果表明：rfaD基因的敲除阻断了大肠杆菌LPS的合成，形成KdO2-lipid A结构，表明脂多糖的结构与菌体表型具有较大相关性。该突变菌株...
- 王建莉李烨王小元
- 关键词：大肠杆菌基因敲除突变菌株内毒素
- 文献传递
- 细菌类脂A的结构修饰及其应用前景被引量：3
- 2010年
- 类脂A是革兰氏阴性细菌细胞外膜外侧脂多糖的主要组成成分,也是内毒素的活性成分,可以被宿主免疫细胞识别并引发疾病。类脂A的生物合成途径相对保守,但在转运到外膜外侧的过程中它的结构被修饰以适应不同的外界环境。类脂A的结构修饰在细菌体内受到严格调控,与细菌的毒性密切相关,却不影响细菌的生长繁殖。主要介绍近几年类脂A结构修饰方面的研究进展,在此基础上分析了类脂A结构修饰在病原菌防治、疫苗开发、工业发酵和食品安全等相关领域的应用前景。
- 陈久洲李烨王小元
- 关键词：内毒素脂多糖类脂A疫苗佐剂食品安全
- 强化两组分分泌系统BrnFE和全局调控因子Lrp的表达促进谷氨酸棒杆菌生成L-异亮氨酸
- BmFE是一种两组分分泌系统,可向胞外分泌包括L-异亮氨酸在内的支链氨基酸及L-甲硫氨酸.Lrp是一种类似的L-亮氨酸响应调控因子,可激活BrnFE编码基因brnFE的表达.
- 尹良鸿胡晓清陈诚李颜颜王小元
- 金黄色葡萄球菌噬菌体不敏感菌株的分离以及噬菌体JS01吸附位点的研究
- 2013年
- 用噬菌体JS01特异性裂解金黄色葡萄球菌ATCC25923后,出现了噬菌体不敏感菌株ATCC25923R。为了解两株细菌对噬菌体JS01敏感性差异的原因并确定JS01作用于ATCC25923的受体位点,采用气相色谱-质谱联用法分析细胞表面磷壁酸的结构并测试相关试剂对JS01裂解能力的影响。ATCC25923R的菌落形态比敏感菌株ATCC25923更光滑,颜色更深。当JS01在ATCC25923菌液中作用1h后,OD600nm值由1.0降低到0.2;当作用于ATCC25923R时,OD600nm值持续上升。ATCC25923和ATCC25923R细胞表面的磷壁酸结构存在微弱差异,ATCC25923R磷壁酸结构中多一种戊糖组分。在葡萄糖、N-乙酰葡萄糖胺(GlcNAc)、磷壁酸3种试剂中,只有GlcNAc会导致噬菌体JS01的裂解能力下降,证实GlcNAc为噬菌体JS01裂解ATCC25923时的吸附位点。
- 贾静静史锋王利平王小元
- 关键词：金黄色葡萄球菌噬菌体
- 细菌内毒素的生物合成途径及分子结构多样性被引量：5
- 2013年
- 细菌内毒素,又名脂多糖,是构成大多数革兰氏阴性细菌外膜外层的主要成分。内毒素的合成途径相当复杂,涉及到几十个基因编码的酶。内毒素的合成起始于细胞质中,随着合成的进行,内毒素分子不断变大,并先后穿越细胞内膜、周质空间和外膜,最后定位于细胞表层。内毒素可以通过TLR4/MD2受体激活先天性免疫系统,可用于开发新的细菌疫苗和疫苗佐剂。
- 王小元宋鸿军
- 关键词：革兰氏阴性菌内毒素脂多糖疫苗佐剂
- 外膜蛋白OmpU对副溶血弧菌耐药性的影响被引量：2
- 2023年
- 为了研究外膜蛋白OmpU对副溶血弧菌耐药性的影响,作者构建了副溶血弧菌中高丰度外膜蛋白OmpU缺失的突变株ΔompU。通过最小抑菌浓度(MIC)检测发现ΔompU对12种抗生素的耐药性发生变化,其中对氨苄青霉素的耐药性增加幅度最高。定量反转录PCR显示,在氨苄青霉素刺激下,野生型副溶血弧菌与ΔompU中肽聚糖合成基因转录水平普遍下调,而编码β内酰胺酶的基因VP_RS17515在野生型中转录水平高于ΔompU。结果表明,副溶血弧菌通过表达β内酰胺酶并降低肽聚糖合成速度的方式应对氨苄青霉素刺激,而OmpU通过改变细胞膜通透性来影响氨苄青霉素的渗入。
- 孟祥宇王建莉黄丹阳周晴檀昕王小元
- 关键词：副溶血弧菌外膜蛋白氨苄青霉素耐药机制
