王立伟
- 作品数：96 被引量：271H指数：9
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- ClC-3 siRNA抑制鼻咽癌细胞调节性容积回缩被引量：4
- 2011年
- 目的用siRNA沉默ClC-3氯通道,探讨ClC-3氯通道在鼻咽癌CNE-2Z细胞调节性容积回缩(regulatory volumedecrease,RVD)中的作用。方法使用终浓度100 nmol/L的ClC-3 siRNA转染鼻咽癌CNE-2Z细胞,流式细胞术检测siRNA的转染率,Western blotting检测ClC-3蛋白表达,活细胞图像系统分析对照组和ClC-3 siRNA组细胞在低渗(160mOsm/L)刺激时的容积调节能力。结果 ClC-3 siRNA转染率为(63.8±3.8)%(n=3,P<0.01),与对照组相比,ClC-3氯通道蛋白的表达减少(60.9±4.0)%(n=3,P<0.01)。对照组细胞的RVD为(42.6±2.8)%(n=20),ClC-3 siRNA组细胞在低渗液中的最大容积与对照组没有显著性差异,但RVD仅为(10.5±4.8)%,RVD抑制率达75.4%(P<0.01)。结论 ClC-3 siRNA成功转染鼻咽癌CNE-2Z细胞,特异性抑制ClC-3蛋白表达,显著降低细胞RVD能力,提示ClC-3氯通道在鼻咽癌细胞调节性容积回缩中起重要作用。
- 叶东张海峰朱林燕王立伟陈丽新
- 关键词：SIRNA鼻咽癌细胞细胞容积
- 酶标法测定脑脊液和血清中的苯巴比妥钠被引量：2
- 2014年
- 目的:建立一种适用于实验室高通量测定动物脑脊液和血清中苯巴比妥纳药物浓度的方法.方法:通过测定各反应物的吸收光谱,确定荷移反应络合物的波长,并使用该波长分别测定苯巴比妥钠在去离子水、动物脑脊液和动物血清中的吸光度,并制定标准曲线.同时通过重复测定特定浓度的苯巴比妥钠吸光度进行仪器稳定性分析,从而建立荷移酶标法测定动物脑脊液和血清中苯巴比妥钠的方法.结果:在水溶液中,苯巴比妥钠与茜素红产生的荷移络合物的最大吸收波长为522 nm,苯巴比妥钠浓度在4~128μmol/L范围内符合比尔定律,蒸馏水组相关系数R^2=0.998,脑脊液组R^2=0.995,血清组R^2=0.991,各实验组线性关系良好.当苯巴比妥钠浓度为64μmol/L时,酶标法9次测定结果的相对标准偏差为0.03%.分光光度法的标准偏差为0.75%.结论:使用酶标法测定脑脊液和血清中的苯巴比妥钠具有操作简便、快速,可行性强,重复性和精密度高的优点,并可实现高通量分析.
- 郑银丽任晖管雪琴杨丽丽陈丽新王立伟
- 关键词：苯巴比妥钠酶标法茜素红脑脊液血清
- Polarized calcium signaling in directional migration of human hepatocellular carcinoma cells
- 杨林杰张海峰叶东罗海朱林燕陈丽新王立伟
- 氯通道在三氧化二砷诱导鼻咽癌细胞凋亡中的作用被引量：1
- 2017年
- 目的:探讨氯通道在三氧化二砷(arsenic trioxide,As_2O_3)诱导人鼻咽癌CNE-2Z细胞凋亡中的作用。方法:采用流式细胞术检测CNE-2Z细胞经As_2O_3作用24及48 h的凋亡率;应用膜片钳技术记录As_2O_3激活的细胞膜电流,并分析其电流特性;采用流式细胞术检测氯通道阻断剂DIDS对As_2O_3诱导的CNE-2Z细胞凋亡的抑制作用。结果:(1)5μmol/L As_2O_3能够时间依赖性地诱导的CNE-2Z细胞凋亡;(2)CNE-2Z细胞外灌流含5μmol/L As_2O_3的等渗溶液能够激活一个具有外向整流特征的电流,激活的电流无明显的时间及电压依赖性失活,翻转电位接近氯平衡电位;(3)As_2O_3激活的电流能够被氯通道阻断剂DIDS和NPPB完全抑制,细胞外灌流47%的高渗溶液能够完全抑制As_2O_3激活的电流;(4)氯通道阻断剂DIDS能够抑制As_2O_3诱导的CNE-2Z细胞凋亡。结论:As_2O_3可以激活CNE-2Z细胞的容积敏感性氯通道。氯通道在As_2O_3诱导的CNE-2Z凋亡中发挥重要作用。
- 吕瑞玲高宏邓志钦王海波梁协稠谭秋蝉朱林燕王立伟陈丽新
- 关键词：氯通道三氧化二砷鼻咽癌细胞凋亡
- 神经传导的新概念:无动作电位的兴奋传导
- 2011年
- 近年来研究揭示在神经传导中存在着无动作电位的兴奋传导机制,它主要涉及细胞膜中胞膜窖专门化脂筏内的分子转导作用,这对兴奋只能通过电现象沿神经进行传导的传统理念是一个重大的挑战。这一机制可能是神经科学基础领域研究的重要进展。
- 王立伟朱林燕王跃春王子栋
- 关键词：神经传导自主神经
- 乙醇激活的鼻咽癌细胞氯电流的分子机制被引量：2
- 2014年
- 目的：研究乙醇对低分化鼻咽癌CNE-2Z细胞氯通道的影响并探讨其分子机制。方法：MTT检测乙醇对细胞生长的影响；全细胞膜片钳技术记录乙醇对氯电流的影响；应用氯通道阻断剂分析该电流的特性；siR-NA干扰技术分析乙醇敏感氯通道的分子本质。结果：在等渗灌流液中记录到微弱的背景氯电流，随灌流液中乙醇浓度（0．17～170 mmol/L）的升高，所激活的氯电流呈倒U型曲线状，17 mmol/L的乙醇激活电流达到峰值，电流呈较明显的外向优势，能被高渗液及氯通道阻断剂5-nitro-2-（3-phenylpropylamino）benzoic acid（NPPB）所阻断；干扰ClC-3氯通道基因表达后乙醇激活的氯电流明显减小。结论：乙醇可能通过激活CNE-2Z细胞的ClC-3氯通道，诱导氯电流的产生。
- 林娜左婉红赖周毅伍嘉宝陈美苑汪源陈丽新王立伟
- 关键词：鼻咽肿瘤氯通道膜片钳术
- 敲低IK1钾通道抑制ClC-3氯通道的表达和功能被引量：2
- 2015年
- 目的:探讨Cl C-3氯通道是否为IK1钾通道的调节靶点,重点研究鼻咽癌细胞IK1钾通道对Cl C-3氯通道功能及蛋白表达的影响。方法:采用siRNA转染技术抑制低分化鼻咽癌上皮细胞(CNE-2Z)IK1基因的表达;real-time PCR技术检测Cl C-3 mRNA的表达;Western blot检测Cl C-3的蛋白表达;细胞免疫荧光结合激光共聚焦显微镜技术检测Cl C-3和IK1蛋白在细胞内分布;全细胞膜片钳记录细胞氯电流。结果:IK1 siRNA可以成功转染CNE-2Z细胞,有效抑制鼻咽癌细胞IK1钾离子通道的表达;用IK1 siRNA抑制鼻咽癌细胞IK1钾离子通道的表达后,Cl C-3的mRNA表达上调而Cl C-3蛋白却表达减少:在低分化鼻咽癌上皮细胞,低渗刺激可激活氯通道,产生一个较大的氯电流,在成功转染IK1 siRNA的细胞,此氯电流明显减弱。结论:敲低IK1钾离子通道可抑制Cl C-3氯离子通道的表达和功能。
- 邹丽莉叶东吕瑞玲汪源孙晓雪朱林燕陈丽新王立伟
- 关键词：CL鼻咽癌膜片钳技术
- 他莫昔芬对不同生长周期鼻咽癌细胞容积激活性电流的作用被引量：4
- 2007年
- 目的:研究Cl-通道抑制剂他莫昔芬(tamoxifen)对G1期和S期鼻咽癌细胞容积激活性电流的抑制效应。方法:运用血清饥饿法或化学药物双阻断法分别将鼻咽癌低分化上皮细胞(CNE-2Z)同步化至G1或S期,用膜片钳技术研究不同细胞周期细胞容积激活性氯通道对阴离子的通透性及他莫昔芬对CNE-2Z细胞容积激活性电流的作用。结果:47%低渗刺激下,G1期和S期细胞产生容积激活性电流,G1期的电流密度大于S期。10-30μmol/L他莫昔芬能完全抑制G1期和S期容积激活性电流,但随浓度升高,达到完全抑制效应所需要的时间缩短。G1期或S期细胞电流被完全抑制的时间有明显差异,在相同浓度他莫昔芬作用下,G1期细胞达到最大抑制效应时间明显短于S期细胞。G1期与S期细胞容积激活性氯通道对阴离子的通透性均为I->Cl->葡萄糖酸根离子,但G1期细胞对I-的通透性高于S期,S期细胞对葡萄糖酸的通透性高于G1期。结论:CNE-2Z细胞G1期与S期的容积激活性电流密度及对阴离子的通透性有差异,G1期和S期细胞对他莫昔芬敏感性不同,提示CNE-2Z细胞对他莫昔芬敏感的容积激活性氯通道在不同生长周期中表达有差异。
- 罗海兵王立伟毛建文焦成钢范爱辉聂思槐李攀陈丽新
- 关键词：鼻咽肿瘤氯化物通道他莫昔芬细胞周期
- DSF-Cu通过影响线粒体功能和细胞骨架诱导鼻咽癌CNE-2Z细胞凋亡被引量：7
- 2016年
- 目的探测双硫仑(disulfiram,DSF)螯合氯化铜(DSF-Cu)通过影响线粒体功能和细胞骨架诱导人低分化鼻咽癌CNE-2Z细胞凋亡。方法采用流式细胞术检测细胞周期、凋亡率、活性氧(reactive oxygen species,ROS)的生成以及线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential,MMP)的改变。AFM探测细胞表面形貌和超微结构、细胞高度、宽度及粗糙度的变化。激光扫描共聚焦显微镜(laser scanning confocal microscope,LSCM)观察细胞骨架F-actin的分布和重组。结果细胞周期检测显示DSF-Cu将CNE-2Z细胞周期阻滞于G2/M期。Annexin-V/PI检测细胞凋亡显示随药物浓度增加,与对照组相比,实验组早凋率和晚凋率、坏死率细胞均明显增加。进一步检测凋亡相关信号发现DSF-Cu可促进CNE-2Z细胞内活性氧水平的增加及诱导MMP下降。AFM成像表明,与对照组相比,随着药物浓度增大,细胞逐渐变小,胞质浓缩,高度增加,膜表面粗糙度降低,变得平整光滑;细胞伪足由对照组的丰富密集,逐渐变短、萎缩,甚至完全破坏。LSCM进一步观察发现DSF-Cu引起F-actin荧光强度减弱,结构重排,严重影响微丝的功能。结论 DSF-Cu可诱导CNE-2Z细胞依赖线粒体的凋亡途径,利用AFM在单细胞水平上分析DSF-Cu对细胞膜的毒性作用,为鼻咽癌的治疗提供新的思路。
- 杨亚萍汪亚帷李梦佳张可凡孙晓雪梁志红陈丽新王立伟杨海峰朱林燕
- 关键词：双硫仑细胞骨架凋亡鼻咽癌线粒体膜电位
- 电压门控氯通道ClC蛋白突变体及相关疾病研究进展被引量：1
- 2010年
- ClC是一组介导氯离子跨膜转运的蛋白质,参与细胞多种生理及病理过程。基因突变形成的异常ClC蛋白影响离子通道门控特性,从而扰乱氯离子的正常跨膜转运,可导致先天性肌强直、先天性癫痫、Bartter综合征、Dents病、视网膜退化病及骨硬化病等多种疾病。
- 张海峰柏志全陈丽新王立伟
- 关键词：氯离子氯离子通道基因突变
