康振
- 作品数：53 被引量：174H指数：8
- 供职机构：江南大学生物工程学院工业生物技术教育部重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江苏省科技支撑计划项目长江学者和创新团队发展计划更多>>
- 相关领域：生物学轻工技术与工程化学工程文化科学更多>>
- 3’-磷酸腺苷-5’-磷酸硫酸的高效合成及其应用被引量：2
- 2019年
- 硫酸化化合物广泛存在于胞浆、细胞表面及胞外基质中,在机体细胞发育、分化、免疫、解毒和信号传递等生命活动过程中起着不可替代的作用。3'-磷酸腺苷-5'-磷酸硫酸(3?-phosphoadenosine-5'-phosphosulfate,PAPS)是化合物硫酸化过程中最常用的硫酸基供体,但目前合成PAPS并最终实现其工业化应用还困难重重。文中主要综述过去10年内关于PAPS的生物合成及应用的研究进展,以期为PAPS的合成及其在芥子油苷、肝素、硫酸软骨素及羟胺硝喹等的生物合成中的应用提供参考。
- 周正雄堵国成康振
- 关键词：芥子油苷
- 优化前体供给与细胞膜通透性强化大肠杆菌合成麦角硫因被引量：4
- 2022年
- 麦角硫因(Ergothioneine,ERG)具有抗氧化、抗炎、辐射保护等多种生理功能,广泛应用于食品、医药和化妆品领域。微生物发酵生产麦角硫因具有极大潜力,然而,由于工程菌株前体供应不充足等因素,麦角硫因的发酵质量浓度以及生产强度低下。作者旨在探究麦角硫因生产不同阶段中的前体限制,并通过优化前体供应解除限制,进而提高大肠杆菌麦角硫因合成能力。在证明组氨酸是限制麦角硫因合成的关键因素基础上,通过优化组氨酸供给,麦角硫因在摇瓶水平的发酵质量浓度达到175.81 mg/L;通过正交试验组合优化了半胱氨酸、柠檬酸铁胺和维生素B6的添加量,发酵质量浓度提高至182.61 mg/L;通过优化甲基供体的添加(1.5 g/L甲硫氨酸与0.6 g/L甜菜碱)以及通过添加0.2 g/dL的CaCl_(2)提高细胞膜通透性,麦角硫因的发酵质量浓度最终提高至243.06 mg/L。采用分批补料发酵培养108 h后,麦角硫因在3 L发酵罐上的发酵水平达到2.01 g/L,生产强度为18.61 mg/(L·h),为麦角硫因的规模化工业生产奠定了基础。
- 陈佳敏王阳堵国成康振
- 关键词：大肠杆菌发酵优化
- 枯草芽孢杆菌产碱性果胶酶
- 本实验首先从六种不同信号肽amyX,bpr,vpr,yvgO,wapA和nprE中筛选出最适合碱性果胶酶胞外表达的信号肽bpr,胞外酶活达到313.7 U mL-1.在此基础上使用强启动子P43表达碱性果胶酶,将碱性果胶...
- 张俊娇康振堵国成陈坚
- 关键词：枯草芽孢杆菌碱性果胶酶信号肽BPRP43
- 微生物发酵生产5-氨基乙酰丙酸研究进展被引量：9
- 2013年
- 5-氨基乙酰丙酸是生物体内吡咯生物合成途径的关键中间产物,具有广泛的应用前景。文中从三方面归纳了国内外关于5-氨基乙酰丙酸的最新研究进展:生产5-氨基乙酰丙酸的微生物筛选分离与诱变;基于C4途径的微生物全细胞生物转化合成5-氨基乙酰丙酸;基于微生物代谢工程改造构建高产5-氨基乙酰丙酸的工程菌株。最后,预测了未来5-氨基乙酰丙酸的研究方向和焦点。
- 康振张俊丽杨森堵国成陈坚
- 关键词：C4途径代谢工程大肠杆菌
- 大肠杆菌四氢嘧啶合成途径的构建与优化被引量：5
- 2021年
- 为了构建重组工程菌株发酵合成四氢嘧啶,解决野生型菌株对高盐环境的依赖,作者克隆了来自伸长盐单胞菌(Halomonas elongata ATCC 33173)的四氢嘧啶合成相关基因簇ectABC并在大肠杆菌(Escherichia coli,E.coli)中重构了四氢嘧啶的合成途径。通过宿主比较发现,与E.coli W3110、E.coli DH5α和高产天冬氨酸的大肠杆菌(命名为E.coli(asp))相比,E.coli BL21(DE3)更适用于四氢嘧啶的合成(185.23 mg/L)。进一步分析了不同拷贝数的表达系统对四氢嘧啶合成的影响,发现高拷贝的pRSFDuet-1为载体时产四氢嘧啶量最高,达267.3 mg/L。在此基础上,采用核糖体结合位点(RBS)优化策略,对四氢嘧啶合成途径3个酶EctA、EctB与EctC进行了组合优化表达,四氢嘧啶产量提高至521.24 mg/L。为强化前体天冬氨酸和天冬氨酸β-半醛的供给,对天冬氨酸激酶、天冬氨酸半醛脱氢酶、磷酸烯醇丙酮酸羧化酶、天冬氨酸转氨酶和天冬氨酸裂解酶进行了过量表达。研究表明,单独强化天冬氨酸激酶的表达更有利于四氢嘧啶的合成(551.24 mg/L),为构建高产四氢嘧啶的工程菌种提供了新的策略。
- 魏伟伟王阳堵国成康振
- 关键词：四氢嘧啶大肠杆菌
- 酵母β-葡聚糖水解酶的表达及应用
- 2021年
- 酵母β-葡聚糖是一种具有多种生物功能的细胞壁结构多糖,但天然的酵母β-葡聚糖水溶性较差,影响了其在医疗、保健食品和化妆品行业中的应用。作者通过β-1,3-葡聚糖水解酶Gly5m和β-1,6-葡聚糖水解酶BT3312水解酵母β-葡聚糖制备小分子酵母葡聚糖,提高其水溶性。以大肠杆菌为宿主,异源表达β-1,3-葡聚糖水解酶Gly5m和β-1,6-葡聚糖水解酶BT3312。在25℃条件下,添加0.2 mmol/L IPTG诱导后,Gly5m和BT3312的最高酶活分别为1086 U/mL和2355 U/mL。酵母β-葡聚糖经过Gly5m和BT3312水解后,溶解率分别提高了2.6倍和2.4倍。采用Gly5m和BT3312共同水解,酵母β-葡聚糖溶解率提高了3.2倍(水溶性酵母葡聚糖的质量浓度为12.5 g/L)。因此,Gly5m和BT3312在提高酵母葡聚糖的水溶性和制备小分子酵母葡聚糖领域具有重要的应用价值。
- 周星王丽堵国成康振
- 关键词：酵母Β-葡聚糖水解酶水溶性
- 产麦角硫因大肠杆菌工程菌株的构建与优化被引量：7
- 2022年
- 麦角硫因(ergothioneine,ERG)是一种天然的抗氧化剂,广泛应用于化妆品、食品以及医药领域。相比于传统植物提取和化学合成方法,微生物发酵合成麦角硫因具有周期短、成本低等优点,因而受到广泛关注。为构建高产麦角硫因的大肠杆菌工程菌株,本研究以大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)为出发菌株,通过引入耻垢分枝杆菌(Mycobacterium smegmatis)来源的麦角硫因合成基因簇egtABCDE以及粟酒裂殖酵母(Schizosaccharomyces pombe)来源的Egt1,构建了从头发酵合成麦角硫因的工程菌株E1-A1,麦角硫因发酵浓度为(95.58±3.20)mg/L。为进一步提高麦角硫因的产量,对前体氨基酸组氨酸、甲硫氨酸以及半胱氨酸合成路径中关键酶的表达进行了强化,结果表明,单一表达基因serA^(T410STOP)、thrA以及两者共表达时,麦角硫因发酵浓度分别提高至(134.83±4.22)mg/L、(130.26±3.34)mg/L以及(144.97±5.40)mg/L。最后,采用分批补料发酵策略,菌株E1-A1-thrA-serA^(*)在无机盐培养基和丰富培养基培养中的产量分别为548.75 mg/L和710.53 mg/L。
- 王丽王阳李江华堵国成堵国成
- 关键词：代谢工程大肠杆菌氨基酸分批补料发酵
- 乙肝表面抗原在酿酒酵母中的异源表达被引量：1
- 2015年
- 乙肝表面抗原HBs Ag是乙肝疫苗的主要组分。从转录水平、翻译水平以及翻译后水平对其进行优化,实现了HBs Ag在重组酿酒酵母中的高效异源表达。与组成型启动子TEF1、TDH3、HXT7、ADH1相比,诱导型启动子GAL1可大幅度提高HBs Ag的表达;与GCCACC和AAAAAA相比,kozak序列TACACA最有利于HBs Ag的翻译表达;而共表达二硫键异构酶pdi对HBs Ag的活性表达具有显著的促进作用。通过3种水平的优化,HBs Ag活性从最初的8.87 IU/g提高至151.08 IU/g;最终,利用Ni柱亲和层析成功获得纯化的HBs Ag,活性为3.32 IU/m L。
- 邱玲钱俊佳康振陈坚
- 关键词：酿酒酵母乙肝表面抗原启动子KOZAK序列共表达
- 代谢工程改造酿酒酵母合成葡萄糖二酸被引量：3
- 2017年
- 葡萄糖二酸是一种高附加值的有机酸,广泛用于食品、医药和化工领域。为获得生产葡萄糖二酸的微生物细胞工厂,通过共表达小鼠来源的肌醇加氧酶(MIOX)及恶臭假单胞菌来源的醛酸脱氢酶(Udh),在酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae CEN.PK2-1C中构建了葡萄糖二酸合成途径,产量为(28.28±3.15)mg/L。在此基础上,通过调控前体肌醇的合成途径,发现肌醇-1-磷酸合成酶(INO1)是葡萄糖二酸合成途径的限速酶,过量表达INO1,葡萄糖二酸产量达到(107.51±10.87)mg/L,提高了2.8倍。进一步弱化竞争支路中磷酸果糖激酶(PFK1)的表达,最终葡萄糖二酸的产量达到(230.22±10.75)mg/L,为进一步获得高产葡萄糖二酸细胞工厂提供基础。
- 巩旭刘叶王毳李江华康振
- 关键词：酿酒酵母代谢工程
- 枯草芽孢杆菌P_(spovG)启动子改造与表征被引量：1
- 2022年
- 枯草芽孢杆菌是重要的工业生产菌株,广泛应用于外源蛋白质的表达。目前在枯草芽孢杆菌中常见组成型启动子中,P_(spovG)作为高强度组成型启动子在表达外源蛋白质时,具有表达量高、稳定性好和适用范围广等优势。作者首先对P_(spovG)上游序列截短,发现将启动子上游序列由原来的251个碱基缩短为26个,仍能保持启动子强度不降低,并确定了紧邻-35元件上游的3个碱基“AGC”为影响启动子强度的关键碱基。其次对启动子的上游A-T富含区以及spacer区域的G-C富含区进行随机突变,证明了上游激活序列中A-T碱基的排列对启动子强度有重要影响,并得到了强度提高的突变体。最后通过将不同表达时期启动子的关键调控序列分别插入突变体的上下游,得到了启动子强度为原始启动子135.1%的新型启动子SP_(spovG)-P_(lytR)。本研究为枯草芽孢杆菌表达系统开发新型强组成型启动子提供了重要的参考。
- 张琳刘平王阳堵国成康振
- 关键词：枯草芽孢杆菌
