袁金钱
- 作品数：14 被引量：30H指数：3
- 供职机构：东北农业大学动物医学学院更多>>
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- 旋毛虫Ts43基因真核表达载体的构建及其在Vero E6细胞中的表达
- 2007年
- 利用RT-PCR技术从黑龙江省猪源旋毛虫获得了Ts43基因,并克隆入pcDNA3.1-CT-GFP真核表达载体中构建重组质粒,用该重组质粒在脂质体介导下转染Vero E6细胞,GFP标签证明质粒DNA成功转染到细胞中并得以表达,通过Western-blot分析,细胞裂解液样品中有1条约66 ku的条带,可被小鼠旋毛虫阳性血清所识别,与预计大小一致,说明,真核表达载体pcDNA3.1-CT-GFP中的Ts43基因在VeroE6细胞中获得了表达,表达产物具有抗原性。
- 王君路义鑫姜曰晓朱江威朱艳梅袁金钱宋铭忻
- 关键词：旋毛虫克隆真核表达
- 旋毛虫实时荧光PCR检测方法的建立与应用研究被引量：8
- 2009年
- 根据旋毛虫隔离种线粒体Ls-rRNA基因序列,设计一对特异性引物及TaqMan MGB探针。以Ls-rRNA阳性重组质粒为模板,建立了旋毛虫实时荧光PCR检测方法。该检测方法对各旋毛虫隔离种具有良好的特异性,而对小鼠、狗和猪正常肌肉组织、猪鞭虫、猪蛔虫、猪钩虫、犬蛔虫等无交叉反应。最小检出量为1.32×102拷贝(10-5条旋毛虫),建立的标准曲线拟合良好,扩增方程Y=-3.43X+19.70,相关系数R2=0.9984,扩增效率为95%。平行检测组内变异系数为1.11%(n=20),同一组不同浓度梯度样本(n=9)间隔30d重复检测,结果无显著性差异。人工感染不同剂量猪旋毛虫的小鼠,在攻虫14d后检出率100%。对经压片镜检、人工胃液消化、胶体金试纸条检测结果为阴性的63份送检狗肉样本中敏感地检出8个阳性。
- 张子群谢晓峰袁金钱由轩徐义刚单琳琳宋铭忻
- 关键词：旋毛虫实时荧光PCR
- 旋毛虫28S rRNA基因片段的克隆及其在分类学上的应用被引量：1
- 2011年
- 为了探讨所采集旋毛虫的分类,利用PCR方法克隆了猪旋毛虫黑龙江隔离种核糖体28S rRNA序列的基因片段。序列分析结果表明,猪旋毛虫黑龙江隔离种与旋毛形线虫(Trichinella spiralis,T1)的进化关系较近,确定为旋毛形线虫(Trichinella spiralis)。结果与传统的分类结果基本一致,为传统的分类学方法提供了新的理论依据。
- 李成魏颖袁金钱宋铭忻
- 关键词：旋毛虫RRNA隔离种
- 改良型贝尔曼氏装置
- 本实用新型提供了一种检查动物和人体内的线虫时稳定性好、灵敏度高、检查时间短、成本低的改良型贝尔曼氏装置。它包括铁架台5和设置在铁架台5上的漏斗1、一端连接漏斗1底端的胶皮管2、一端连接胶皮管2另一端的试管3、装设在短试管...
- 宋铭忻路义鑫马广鹏韩彩霞袁金钱朱江巍姜曰晓王君朱艳梅
- 文献传递
- 一例海涂放牧山羊寄生虫病的诊治
- 2010年
- 陈建祥高建龙袁金钱沈奇顾来根
- 关键词：羊寄生虫病海涂诊治放牧萨能山羊本地山羊
- 旋毛虫不同隔离种成囊前期幼虫49kuES结构基因的克隆与序列分析
- 根据Genebank中已发表的序列(M64242)为参考设计引物,用SDS裂解液配合蛋白酶K的方法提取总RNA,用RT-PCR方法从6个旋毛虫隔离种的成囊前期幼虫中扩增出了49kuES结构基因,将目的基因定向克隆入pMD...
- 路义鑫宋铭忻姜曰晓王君朱艳梅朱江巍袁金钱
- 关键词：旋毛虫成囊前期幼虫克隆
- 文献传递
- 本地毛形线虫HSP70基因的克隆与序列分析被引量：3
- 2007年
- 根据GenBank中已发表的布氏旋毛虫HSP70基因序列设计了1对引物，用Trizol法从本地毛形线虫肌幼虫虫体中提取总RNA，用RT-PCR方法扩增了HSP70基因，将目的基因克隆至pMD18-T载体，转化大肠杆菌DH5α。重组质粒用PCR、限制性内切酶BarnHⅠ和HindⅢ进行单、双酶切鉴定。测序结果表明，成功克隆了本地毛形线虫HSP70基因。序列分析表明，HSP70基因比较保守，不同物种之间氨基酸的同源性在40％～80％。与布氏旋毛虫HSP70序列相比，CDS区多出9个碱基，但核苷酸序列和氨基酸同源性分别为98%和94％，存在1个糖基化位点和1个潜在的信号肽位点。
- 袁金钱路义鑫韩彩霞宋铭忻
- 关键词：本地毛形线虫HSP70基因
- 旋毛虫活体传代方法
- 本发明公开了一种旋毛虫活体传代方法。它包括：首先选择2月龄、品种相同的健康实验动物接种，接种前停饮2～3天；在生物显微镜下，将计数准确的幼虫用小型胃管经口接种给实验动物；实验动物接种后放在饲养笼具中，每天观察接种实验动物...
- 宋铭忻路义鑫韩彩霞袁金钱朱江巍姜曰晓王君朱艳梅
- 文献传递
- 旋毛形线虫P53重组蛋白抗体间接ELISA检测方法的建立被引量：8
- 2008年
- 以纯化的旋毛形线虫P53排泄分泌(ES)重组蛋白作为包被抗原,建立了检测旋毛形线虫P53ES蛋白抗体的间接ELISA方法,并确定了间接ELISA的最适反应条件:抗原包被浓度为2μg/mL(100μL),血清稀释度为1∶200,辣根过氧化物酶标记羊抗鼠IgG抗体稀释度为1∶10000,抗原和血清于37℃反应1.5h,血清和二抗于37℃反应1h,底物于37℃显色10min。应用该方法对试验小鼠血清进行检测,结果表明,建立的间接ELISA方法具有较好的特异性和重复性,适用于检测特异性P53血清抗体。
- 朱江巍韩彩霞袁金钱朱艳梅宋铭忻路义鑫
- 关键词：旋毛形线虫原核表达间接酶联免疫吸附试验
- 黑龙江省松花江地区绵羊胃肠道线虫虫卵排出与成虫寄生的季节动态被引量：8
- 2007年
- 采用粪便检查法、幼虫培养法和蠕虫学剖检法对黑龙江省松花江地区羊胃肠道线虫虫卵排出与成虫寄生的季节动态进行了研究。结果表明,成年羊胃肠道线虫的虫卵排出量和成虫寄生量于5月出现一次明显的春季高潮,8月又出现一次较小的高峰,而一年的其他时期,虫卵排出量和成虫寄生量很低。羊胃肠道线虫的优势虫种是捻转血矛线虫、哥伦比亚食道口线虫、羊仰口线虫、毛圆线虫和毛首线虫。羔羊粪便中最早检获虫卵的时间是6月下旬,一年内虫卵排出量只在7月下旬出现一次高峰。研究结果对控制黑龙江省羊消化道线虫病有十分重要的意义。
- 宋铭忻马广鹏韩彩霞朱江巍袁金钱朱艳梅路义鑫
- 关键词：绵羊胃肠道线虫
