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郑宽瑜: 作品数：47 被引量：136H指数：7; 供职机构：云南省农业科学院更多>>; 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划云南省科技计划项目更多>>; 相关领域：农业科学轻工技术与工程生物学医药卫生更多>>

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植物病毒粒体在寄主细胞中的原位聚集特征被引量：7: 2019年; 病毒粒体的原位聚集特征是快速诊断植物病毒及研究其系统侵染的基础,但国内外对此研究和报道较少。本研究采用马铃薯Y病毒属病毒、烟草花叶病毒、番茄斑萎病毒属病毒、水稻矮缩病毒、黄瓜花叶病毒等不同形态的植物病毒自然感染或人工接种的植株样品,比较了研磨过滤、蔗糖密度梯度离心、切片浸渍法、超薄切片与高压冷冻等不同电镜制样方法观察效果。结果表明,以本实验室发明的切片浸渍(原生质体裂解)法负染色制样与超薄切片制样透射电镜观察,可以得到线状、杆状和被膜球状植物病毒粒体在寄主细胞中的典型原位聚集特征,借此可区分不同属或种,对植物病毒的快速诊断鉴定具有重要参考价值。在此基础上,对应用植物病毒粒体原位聚集特征深入研究病毒复制、装配与运动的机制进行探讨,为植物病毒的系统侵染机理研究提供依据。; 张仲凯郑宽瑜王田田吴少政裴卫华; 关键词：透射电镜

西藏昌都市卡若区蔬菜主要病毒检测及番茄斑萎病毒鉴定: 2023年; 为明确西藏昌都市卡若区高原条件下的蔬菜主要病毒种类,对温室、大棚和露地栽培的主要蔬菜进行了病毒病调查,采集典型病毒病症状样品进行ELISA检测,明确病毒种类;并利用电子显微镜观察,RT-PCR扩增克隆与测序分析对主要病毒进行鉴定分析。ELISA检测结果表明,西藏昌都市卡若区温室及大棚栽培的番茄、辣椒和莴苣上的主要病毒有番茄斑萎病毒(tomato spotted wilt virus,TSWV)、马铃薯Y病毒(potato virus Y,PVY)及凤果花叶病毒(pepino mosaic virus,PepMV)。其中TSWV检出率最高,为45%。进一步对检出TSWV的蔬菜样品进行电子显微镜观察,发现其中含有典型的正番茄斑萎病毒属Orthotospovirus病毒粒体,应用TSWV-N基因特异性引物进行RT-PCR扩增克隆和序列分析,发现西藏昌都市卡若区蔬菜感染的TSWV与云南TSWV分离株亲缘关系最近。本研究结果明确了西藏昌都市卡若区蔬菜的主要病毒种类。综合抗体检测、病毒粒体形态观察与分类相关基因的克隆测序结果,明确了西藏昌都市卡若区蔬菜感染的主要病毒为TSWV。这也是TSWV在西藏的首次报道,为了解TSWV的发生分布及其防控提供了依据。; 郑宽瑜熊智琦魏治镭吴阔王茂森苏晓霞巴宗次仁措姆王田田张仲凯; 关键词：番茄辣椒莴苣番茄斑萎病毒

一种番茄斑萎病毒属病毒基因及其应用: 本发明公开了一种番茄斑萎病毒属病毒即辣椒黄花环斑病毒基因序列（包括RNA或DNA分子）及其应用。所述的病毒基因序列的碱基序列如SEQ ID NO：1所示，能够编码病毒的核壳体蛋白（N）及非结构蛋白（NSs）；或所述的病毒...; 董家红郑宽瑜张仲凯吴阔张丽珍

番茄褐色皱纹果病毒(ToBRFV)云南建水分离物鉴定及全基因组序列分析: 2025年; 番茄褐色皱纹果病毒(tomato brown rugose fruit virus,ToBRFV)近年来在全球番茄产区快速发生蔓延,造成严重的经济损失。云南建水番茄上出现疑似ToBRFV感染的症状,并对周边番茄产区产生危害。本研究对云南建水田间疑似ToBRFV感染的番茄果实样品进行电子显微镜观察及RT-PCR检测鉴定,并进一步对分离株进行全基因组测序分析,构建系统进化树分析其与其它ToBRFV分离株的进化关系。结果表明,从感病的番茄果实上发现杆状病毒粒体,大小约18 nm×300 nm,具有烟草花叶病毒属病毒的典型形态特征;用ToBRFV特异性检测引物进行RT-PCR扩增得到591 bp目的片段,经NCBI blast比对,与ToBRFV具有最高一致率(达99%以上),将该分离株命名为ToBRFV-2022-JS(GenBank登录号:OR593752)。测序发现ToBRFV-2022-JS基因组全长6386 nt,具有4个ORFs,分别编码126 kDa和183 kDa复制酶,30 kDa运动蛋白MP和17.5 kDa外壳蛋白CP。进化树分析显示该分离株与ToBRFV银川分离株(GenBank登录号:OR500698.1)的亲缘关系最近,核苷酸序列一致率为99.73%。上述结果表明云南建水番茄果实受到ToBRFV感染。该结果为ToBRFV在云南番茄产区的监测与防控提供了依据。; 肖雨晴吕高莹李树军陈永对苏晓霞杨李源滨周晓罡余大朝王田田郑宽瑜张仲凯; 关键词：系统进化分析

金沙江干热河谷地区贡菜生理性病害和药肥害识别与防治技术: 2024年; 金沙江干热河谷地区是新兴的贡菜优势产区,在高种植效益的驱动下,种植户常年连作和粗放管理成为普遍现象,导致贡菜连作障碍等生理性病害、药肥害日趋严重。通过科学识别贡菜生理性病害及药肥害,分析产生的原因,提前采取相应的栽培管理措施进行预防,可提高贡菜品质,确保贡菜产业的健康发展。; 陈侃郑宽瑜李进斌黄文科张艳明邵宏婷; 关键词：金沙江干热河谷贡菜生理性病害

番茄斑萎病毒运动蛋白NSm的原核表达及抗体制备被引量：2: 2015年; 将番茄斑萎病毒(Tomato spotted wilt virus,TSWV)运动蛋白NSm基因克隆到原核表达载体pET-32a(+)中,利用大肠杆菌系统表达NSm蛋白,以Ni^(2+)-NTA agarose亲和柱纯化该蛋白与His组氨酸的融合蛋白,免疫家兔制备融合蛋白多克隆抗体。Western blot检测显示,该抗体与NSm重组蛋白以及普通烟病叶中的NSm蛋白具有特异性反应。采用该抗体对TSWV感染的普通烟叶片低温超薄切片进行免疫胶体金标记,透射电镜观察发现特异性金颗粒主要定位在病叶细胞的胞间连丝中,而健康烟草叶片组织中没有金颗粒特异性标记。结果表明,该抗体可用于研究NSm在细胞中的定位。; 尚卫娜郑宽瑜董家红张仲凯洪健周雪平; 关键词：番茄斑萎病毒

番茄环纹斑点病毒Gn蛋白的原核表达及多抗血清制备被引量：1: 2017年; 通过生物信息学预测,番茄环纹斑点病毒(Tomato zonate spot virus,TZSV)Gn蛋白为跨膜蛋白,有3个跨膜结构域,抗原表位预测发现非跨膜区包含有较高的抗原指数区域,因此选择Gn蛋白的非跨膜区进行原核表达及多抗血清制备。用特异性引物,通过RT-PCR从感染TZSV的番茄中扩增出部分Gn基因片段,将获得的片段构建到原核表达载体pET-30a中,获得原核表达载体pET-30a-Gn,转化大肠杆菌BL21(DE3),用IPTG诱导表达。SDS-PAGE电泳分析显示,高效诱导表达了40 kD融合蛋白。用回收纯化的融合蛋白免疫家兔,获得多抗血清。间接ELISA测定多抗血清的效价为1/16 384。利用制备好的抗血清对感染TZSV的病样进行Western blotting检测,能检测到特异性条带。结果表明该抗血清特异性良好,可用于TZSV Gn相关的免疫反应实验。; 郑宽瑜尚卫娜张洁郑雪董家红; 关键词：原核表达抗血清

一株深绿木霉菌菌株及其在防治三七根腐病中的应用: 本发明公开了一株深绿木霉菌菌株及其在防治三七根腐病中的应用。本发明的深绿木霉菌菌株，所述的深绿木霉菌菌株为PRWS21，保藏名称为深绿木霉菌Trichoderma atroviride，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会...; 郑宽瑜魏治镭张仲凯苏晓霞郑雪周凤陈永对吴阔

番茄斑萎病毒属病毒非结构蛋白NSs的生物信息学分析被引量：1: 2014年; 番茄斑萎病毒属(Tospovirus)病毒编码的非结构蛋白NSs,可能在病毒复制、转录、抑制RNA沉默中起重要作用,本文利用生物信息方法对21个Tospovirus病毒成员的NSs序列进行分析,为进一步研究NSs的功能提供参考信息。从GenBank数据库中下载NSs基因序列,用DNAMAN5.0做NSs相似性矩阵分析,发现一些Tospovirus病毒成员之间的NSs氨基酸序列相似性很低,最低仅为7.1%;用ClustalX2.1进行NSs的氨基酸多序列比对分析,发现Tospovirus病毒成员的NSs相对保守区主要位于NSs的C端的位置,高度保守的氨基酸位点共有9个;PROSITE对NSs进行模体预测分析,结果显示Tospovirus病毒NSs共有的蛋白修饰:C蛋白激酶磷酸化、酪蛋白激酶II磷酸化和N-酰基化。此外,不同种的Tospovirus病毒NSs模体也表现出了多样性的特点。预测结果为下一步研究NSs功能奠定了基础。; 郑宽瑜董家红苏晓霞方琦郑雪张仲凯; 关键词：番茄斑萎病毒属非结构蛋白 NSS 生物信息学

单头西花蓟马总RNA提取方法的比较研究被引量：1: 2017年; Tri Pure法和RNA提取试剂盒法是目前实验室动植物RNA提取的常用方法。本试验通过对两种不同的RNA提取试剂盒与Tri Pure法进行比较,发现Trans公司研发的型号为ER501-01的Trans Zol Up Plus RNA Kit试剂盒适合提取单头西花蓟马总RNA,所得到的RNA纯度和浓度都比较高。该研究结果为通过分子手段研究蓟马等小型昆虫提供理论基础。; 徐弢苏晓霞张晓林陈永对郑雪郑宽瑜陈勇赵立华刘小烛张洁; 关键词：西花蓟马总RNA

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