孔德晓
- 作品数:19 被引量:63H指数:4
- 供职机构:山东大学第二医院更多>>
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- 一种过表达人IL-1Ra的间充质干细胞及其应用
- 本发明提供了一种过表达IL‑1Ra的间充质干细胞在制备预防和治疗GVHD中的应用。用过表达IL‑1Ra的质粒包装制备慢病毒,然后感染MSCs细胞,抗性筛选后获得稳转细胞系MSC‑oeIL‑1Ra,该细胞系可用于aGVHD...
- 郑成云姜杨王顺业孔德晓
- 鸢尾素在制备治疗再生障碍性贫血药物中的应用
- 本发明公开了鸢尾素在制备治疗再生障碍性贫血药物中的应用,给药方式为腹腔注射给药,给药剂量为0.5μg/g;本发明的鸢尾素在制备治疗再生障碍性贫血药物中的应用,由于鸢尾素无种属特异性,组织相容性好,因此对再生障碍性贫血患者...
- 唐东起郑成云孔德晓李慧
- 高三尖杉酯碱诱导的白血病耐药细胞基因表达谱的变化
- 2009年
- 目的探讨高三尖杉酯碱(HHT)诱导的人白血病细胞耐药相关分子。方法在前期建立的HHT诱导的人白血病多药耐药细胞株K562/HHT的基础上,采用基因芯片技术比较K562/HHT细胞、其亲本K562细胞以及用耐药逆转剂米非司酮(RU486)作用后的K562/HHT(K562/HHT/RU486)细胞三者基因表达谱的差异,选择在这三种细胞中呈动态变化的骨髓细胞X染色体上酪氨酸激酶(BMX)基因用RT—PCR和Westernblot法在转录和翻译水平进行验证,进而转染BMX基因到K562和K562/HHT细胞,观察BMX过表达时这两种细胞内柔红霉素(DNR)含量的变化,确定BMX是否在K562/HHT细胞耐药形成中发挥作用。结果耐药细胞K562/HHT与其亲本K562细胞相比,共有117个基因表达有显著差异,其中57个基因表达明显上调,60个基因表达明显下调,耐药细胞K562/HHT中多药耐药基因mdr-1表达明显上调;K562/HHT/RU486细胞与K562/HHT细胞相比,13个基因表达明显上调,37个基因表达明显下调。这些差异表达的基因涉及耐药、细胞信号传导、细胞分化、细胞增殖、转录调节以及离子转运等。基因NM-001721(BMX)、NM-031459(SESN2)、NM-033642(FGF13)和AL049309(SFRS12)在两组芯片中的表达均有显著差异。其中BMX基因在K562/HHT细胞中的表达与K562细胞相比,明显上调,在K562/HHT/RU486细胞则较K562/HHT细胞减低。进一步用RT—PCR和Westernblot法检测得到了相同的结果。RT—PCR和Westernblot证实BMX质粒转染的K562及K562/HHT细胞BMX表达均上调,流式细胞术检测到K562及K562/HHT细胞内DNR含量荧光强度分别为79.28±4.04和29.84±2.67,均较转染前荧光强度158.52±8.08和58.58±6.53显著减低。结论BMX在高三尖杉酯碱诱导的人白血病多药耐药细胞株K562/HHT耐药性产生中发挥作用。
- 于晓林刘永王涓冬孔德晓陈春燕
- 关键词:K562细胞多药高三尖杉酯碱基因BMX
- caspase-8靶向小发夹RNA抑制肝细胞凋亡的研究
- 2008年
- 目的研究针对caspase-8 mRNA的小发夹RNA(shRNA)真核表达载体对肝Hepa1-6细胞凋亡的干扰作用。方法TNF-α诱导Hepa1-6细胞凋亡,脂质体法将shRNA表达载体转染入Hepa1-6细胞中,24h后应用荧光实时定量PCR和Western blot法分别在mRNA和蛋白水平测定其caspase-8表达差异,流式细胞仪观察细胞凋亡的变化。结果TNF-α作用后Hepa1-6细胞caspase-8 mRNA由(0.050±0.006)升高至(0.286±0.063)(P<0.01),而shRNA表达载体Pgenesil-casp8使其下降至(0.098±0.037)(P<0.01)。转染Pgenesil-casp8重组质粒后caspase-8蛋白表达与mRNA荧光实时定量PCR结果吻合。TNF-α诱导Hepa1-6细胞凋亡率由(4.70±0.89)%升高至(17.40±2.21)%(P<0.01),Pgenesil-casp8作用后下降至(1.20±0.32)%(P<0.05)。结论针对caspase-8 mRNA的shRNA真核表达载体可有效抑制肝细胞Hepa1-6凋亡。
- 林森刘霞孔德晓曲云东张利宁张源朝
- 关键词:CASPASE-8RNA干扰凋亡
- 高三尖杉酯碱联合IFNα-2b可促进白血病源性树突状细胞成熟被引量:4
- 2009年
- 目的:研究高三尖杉酯碱(HHT)、干扰素α-2b(IFNα-2b)和两者联合(HHT+IFNα-2b)对白血病源性树突状细胞(DCs)的促成熟作用。方法:在白血病多药耐药细胞K562/A02中加入细胞因子rhGM-CSF和rhIL-4,7d后Wright-Gimsa染色观察细胞形态的变化,流式细胞术检测细胞免疫表型的变化,同种混合淋巴细胞反应、CTL杀伤效应、细胞因子IL-12的分泌来评价此白血病源性DC的成熟程度,然后在上述白血病源性DC中分别加入HHT、IFNα-2b和HHT+IFNα-2b,3d后以上述同样方法检测它们对此白血病源性DC的促成熟作用。结果:K562/A02细胞在rhGM-CSF和rhIL-4作用7d后,CD83、HLA-DR和CD86分子的表达分别为(65.50±8.40)%、(32.00±4.32)%和(18.65±3.20)%,经HHT作用后这3种分子的表达升高到(85.36±8.42)%、(39.58±7.68)%和(35.53±4.35)%;经IFNα-2b作用后升高到(87.15±7.59)%、(40.53±6.30)%和(38.45±6.42)%;经HHT+IFNα-2b联合作用后升高到(94.38±6.59)%、(52.75±8.51)%和(42.98±9.87)%,与作用前相比差异均显著。经HHT、IFNα-2b和HHT+IFNα-2b作用后具有典型DC形态的细胞增多。经HHT和IFNα-2b作用的DC均可刺激T细胞产生较强的增殖效应,诱导产生的CTL对靶细胞K562/A02的杀伤率明显增强且当效靶比为20:1时杀伤效率最强,IL-12分泌明显增高。结论:HHT和IFNα-2b对白血病源性DC有促成熟作用,且两者联用时作用最强。
- 孔德晓陈春燕王涓冬于晓林
- 关键词:高三尖杉酯碱干扰素Α-2BK562/A02细胞
- 放射性肝损伤的血清比较蛋白质组学分析被引量:3
- 2011年
- 目的:通过分离、鉴定及验证SD肝硬化大鼠肝脏放疗前后血清差异蛋白质的表达,探讨可能用于检测及监控放射性肝损伤的早期生物学指标。方法:8只健康成年SD大鼠皮下注射四氯化碳(CCl4),连续6周,建立肝硬化模型后随机分组,每组4只,即对照组和实验组。对照组大鼠(CCl4组)未给予放疗,实验组大鼠(CCl4+放疗组)行半肝照射,单次剂量15 Gy。6 h后分别提取2组大鼠的血清总蛋白,进行比较蛋白质组学分析。采用双向凝胶电泳分离蛋白,经图像分析识别2组大鼠放疗前后差异表达的蛋白质。应用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALD-TOF-MS)鉴定差异蛋白质。应用Western blotting对血清中乙酰肝素酶和肝细胞生长因子受体的表达水平进行验证。结果:获得了分辨率和重复性均较好的凝胶蛋白图谱。共筛选出33个在实验组明显差异表达的蛋白点,其中12个蛋白质鉴定成功。在这12个蛋白质中,实验组中5个表达上调,7个表达下调。Westernblotting进一步证实了实验组乙酰肝素酶表达上调,肝细胞生长因子受体表达下调。结论:成功鉴定了12个与放射性肝损伤相关的蛋白。乙酰肝素酶和肝细胞生长因子受体可能作为预测及监控放射性肝损伤的早期指标。临床上要将二者作为可能的生物学标志物,其敏感性和特异性还有待进一步研究。
- 李晓梅姜玉华张在云孔德晓孙殿水于晓明孙洪强
- 关键词:放疗乙酰肝素酶蛋白质组
- 米非司酮逆转K562/A02细胞多药耐药的研究被引量:9
- 2007年
- 目的研究孕激素拮抗剂米非司酮对白血病多药耐药细胞 K562/A02的逆转作用及其机制。方法 MTT 法检测米非司酮作用72 h 后 K562/A02细胞增殖及其对阿霉素杀伤敏感性的变化;流式细胞术检测米非司酮作用前后 K562/A02细胞表面 P 糖蛋白的表达和细胞内柔红霉素的浓度;免疫组化法观察米非司酮作用前后 K562/A02细胞凋亡相关蛋白 bcl-2、Bax、caspase-3的表达;RT-PCR 检测米非司酮作用后对 K562/A02细胞内葡萄糖神经酰胺合成酶(GcS)mRNA 表达的影响。结果2.5、5.0和10.0μmol/L 米非司酮不抑制 K562/A02细胞的增殖,但上述浓度的米非司酮作用后K562/A02细胞对阿霉素的敏感性较前分别增强了1.68、4.17和10.71倍。K562/A02细胞表面 P 糖蛋白的表达为(49.03±5.32)%,10 μmol/L 米非司酮作用72 h 后降低到(28.60±2.13)%(P<0.01);K562/A02细胞内柔红霉素的浓度为(61.07±8.61)%,而10 μmol/L米非司酮作用后升高到(92.72±3.48)%(P<0.01)。经10 μmol/L 米非司酮作用后,bcl-2蛋白表达由(56±9)%降低到(37±6)%(P<0.05);Bax 蛋白由(40±5)%升高到(87±10)%(P<0.01);caspase-3蛋白则由(36±7)%升高到(89±6)%(P<0.01)。RT-PCR 结果显示 K562/A02细胞 GcS mRNA 的表达较K562细胞明显升高,10 μmol/L 米非司酮能明显降低 K562/A02细胞内 GcS mRNA 的表达。结论米非司酮可逆转白血病 K562/A02细胞的多药耐药,且具有剂量依赖性。10 μmol/L 米非司酮能明显逆转白血病 K562/A02细胞的多药耐药,其机制与降低 P 糖蛋白的水平,调节凋亡相关蛋白 bcl-2、Bax、caspase-3的表达,降低 GcS mRNA 有关。
- 孔德晓陈春燕许复郁贾继辉
- 关键词:米非司酮多药耐药蛋白
- 白血病的免疫调节及多药耐药逆转的初步研究
- 本研究以白血病细胞株K562/A02(K562为慢性粒细胞白血病急性变细胞株,K562/A02是K562经阿霉素诱导生成的多药耐药细胞株)为研究对象,应用细胞因子rhGM-CSF和rhIL-4将其诱导成为功能不成熟的DC...
- 孔德晓
- 关键词:白血病细胞多药耐药性树突状细胞免疫调节耐药逆转
- 儿童重症肺炎2044例肺泡灌洗液细菌病原学分析被引量:31
- 2014年
- 目的支气管肺泡灌洗液(BALF)培养及微生物敏感性试验(简称药敏)调查儿童重症肺炎的病原菌及耐药率。方法对山东大学齐鲁儿童医院2009年1月至2011年12月收治的2044例重症肺炎住院患儿行支气管镜下肺泡灌洗术,并对支气管肺泡灌洗液进行细菌培养及药敏分析。结果肺泡灌洗液培养出病原菌247例,感染优势菌为肺炎克雷伯菌49例、大肠埃希菌44例、阴沟肠杆菌23例、铜绿假单胞菌17例;肺炎链球菌21例;金黄色葡萄球菌11例;溶血葡萄球菌9例。药敏试验结果显示:青霉素G、氨苄西林、阿莫西林克拉维酸、头孢呋辛、红霉素、苯唑西林耐药率均超过50%。所测菌株对头胞哌酮舒巴坦未见耐药发生。结论支气管镜下肺泡灌洗液细菌培养为较好的下呼吸道病原菌检测方式,该组重症肺炎以革兰阴性菌感染为主,早期检测病原菌和耐药性对提高疗效和改善预后是非常重要的。
- 刘霞马静张忠晓赵凤美牛铁环闫秀丽孔德晓孟晨
- 关键词:支气管肺泡灌洗液肺炎重症细菌检测微生物敏感性试验
- 鸢尾素在制备治疗再生障碍性贫血药物中的应用
- 本发明公开了鸢尾素在制备治疗再生障碍性贫血药物中的应用,给药方式为腹腔注射给药,给药剂量为0.5μg/g;本发明的鸢尾素在制备治疗再生障碍性贫血药物中的应用,由于鸢尾素无种属特异性,组织相容性好,因此对再生障碍性贫血患者...
- 唐东起郑成云孔德晓李慧