林学文
- 作品数：6 被引量：13H指数：1
- 供职机构：中国医科大学基础医学院更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划沈阳市科学技术计划项目辽宁省科学技术计划项目更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 负向调节因子重编程诱导大鼠骨髓间充质干细胞向胰岛内分泌细胞分化的研究被引量：1
- 2016年
- 目的重编程诱导大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)向胰岛内分泌细胞分化并探讨其可能的分化机制。方法原代培养的大鼠骨髓MSCs经分离、培养至第3代后,用负向调节因子Rest/Nrsf、Shh慢病毒干扰载体转染并培养10 d,通过实时定量RTPCR和免疫荧光检测胰岛细胞分化相关基因的表达。结果 MSCs慢病毒转染后,胰岛素、胰高血糖素及生长抑素的表达明显升高,并表达胰岛内分泌细胞分化的相关基因。结论通过转染shRest/Nrsf、shShh慢病毒载体能够诱导大鼠MSCs向胰岛内分泌细胞分化,EGFR、ERK1、MMP以及PI3K等参与这一分化过程。
- 李宏图林学文李彩虹庞希宁
- 关键词：骨髓间充质干细胞慢病毒载体
- 人羊膜间充质干细胞储备库的构建被引量：1
- 2013年
- 目的构建人羊膜间充质干细胞库,为间充质干细胞的应用提供充足的细胞来源。方法将胎盘冲洗干净后,分离出羊膜组织,从羊膜组织原代和传代培养羊膜间充质干细胞(hAMSCs)。用MTT法检测细胞生长方式,流式细胞仪分析细胞表型及干细胞标记,使用不同的诱导分化培养基检测鉴定hAMSCs多向分化的能力,细胞周期等鉴定其生物学特性,将磁性纳米颗粒标记的人羊膜间充质干细胞移植到小鼠创面进行细胞功能评价。结果羊膜来源的细胞生长呈典型的成纤维细胞形态。细胞传代过程中未发现细菌、真菌、霉菌、支原体和内毒素等的污染。细胞表达间充质干细胞表面标记CD90和CD105,不表达CD45、CD14、CD34和HLA-DR。在不同的条件培养基培养状态下,细胞可向成骨、成软骨和成脂方向分化。细胞大多数处于G1期,仅少数细胞处于活跃的增殖期G2;建库用人羊膜间充质干细胞可显著促进小鼠创面愈合(P<0.05)。结论所得到的细胞为人羊膜间充质干细胞。羊膜间充质干细胞具有与骨髓间充质干细胞相似的生物学特性。初步建立了库存细胞的生物学特性检测标准和相应的干细胞质量控制体系。
- 庞希宁刘晓玉施萍王竟林学文张殿宝谭丽萍
- 关键词：人羊膜间充质干细胞生物学特性细胞分化细胞库
- TALEN靶向敲除REST对U-87细胞增殖和迁移的影响
- 2017年
- 目的研究TALEN(transcription activator-like effector nuclease)靶向敲除REST(repressor element 1-silencing transcription factor)对U-87细胞增殖和迁移能力的影响。方法使用分子克隆手段构建TALEN质粒;通过western blot分析TALEN打靶效率;分别使用CCk-8法和Transwell小室法检测细胞增殖和迁移能力。结果 TALEN能够有效打靶U-87细胞中的REST,蛋白水平显著下调;TALEN靶向敲除REST能够显著降低U-87细胞的增殖和迁移水平。结论 TALEN能够高效打靶U-87细胞中的REST,进而抑制U-87细胞的增殖和迁移能力。
- 张殿宝李莹林学文王瑞阚周密庞希宁
- 关键词：TALENREST神经胶质瘤增殖迁移
- 靶向REST基因TALEN质粒的快速构建与活性检测被引量：1
- 2016年
- 目的针对人REST基因设计并构建特异性类转录激活因子效应物核酸酶(TALEN)质粒,快速获得具有较高突变效率的TALEN。方法根据REST的序列信息设计TALEN靶位,使用单元组装的方法快速构建TALEN质粒,在293T细胞中进行活性检测并计算突变效率。结果针对REST设计并成功构建5个TALEN质粒,组成6对TALEN并实现基因打靶,其中L1和R3组合的突变效率达到60.9%。结论成功获得了靶向人REST基因的高效TALEN,为进一步研究REST的基因功能及其在相关疾病中的作用奠定基础。
- 张殿宝赵峰张涛林学文王瑞施萍庞希宁
- 关键词：REST质粒构建活性检测
- 过氧化氢诱导人皮肤成纤维细胞衰老模型的建立被引量：9
- 2019年
- 目的应用过氧化氢(H_2O_2)诱导人皮肤成纤维细胞衰老,建立体外细胞衰老模型。方法组织块贴壁法分离培养人皮肤成纤维细胞,免疫荧光法对获得的细胞进行鉴定,采用50μmol/L、100μmol/L、200μmol/L、400μmol/L的H_2O_2处理细胞1h、2h两个时间点,然后正常培养4d,应用细胞增殖实验,衰老相关的β-半乳糖苷酶(SA-β-gal)染色实验,确定H_2O_2氧化应激下的损伤力和细胞衰老率。结果镜下可见细胞呈梭形或多角形,结合免疫荧光结果,分离获得的细胞即为成纤维细胞。用50μmol/L、100μmol/L H_2O_2处理1h、2h后虽然活细胞较多,但是SA-β-gal染色阳性率较低。200μmol/L、400μmol/L H_2O_2处理2h组SA-β-gal染色阳性率较高,但细胞量较少给以后实验带来较多困难。200μmol/L、400μmol/L H_2O_2处理1h组细胞数量,SA-β-gal染色阳性率最高且二者间无明显差异。结论选取200μmol/L H_2O_2处理1h作为建立衰老细胞模型。
- 潘长伟赵峰郎宏鑫林学文施萍庞希宁
- 关键词：H2O2衰老人皮肤成纤维细胞
- 普罗布考对高糖诱导的脂肪间充质干细胞损伤的保护作用被引量：1
- 2014年
- 目的 探讨普罗布考在保护人脂肪间充质干细胞（hADSCs）对抗高糖引起损伤中的作用及机制.方法 原代培养人脂肪间充质干细胞hADSCs,应用免疫荧光对3～5代细胞表面抗原CD34、CD45、CD90、CD105进行表型鉴定.将hADSCs分为正常糖对照组（CON组）、高糖组（GLU组）、普罗布考＋高糖组（PRO＋GLU组）、抑制剂SB203580＋高糖组（SB＋GLU组）、普罗布考组（PRO组）、抑制剂SB203580组（SB组）.MTT法测定细胞增殖;流式细胞仪检测细胞凋亡情况;DCFH-DA法检测细胞内活性氧水平.Western blot技术检测p-p38MAPK蛋白的表达水平.结果 与CON组比较,GLU组hADSCs细胞增殖活性明显降低（P＜0.05）,凋亡细胞比例、ROS水平显著增加（P＜0.05）;与GLU组比较,PRO＋GLU组和SB＋GLU组hADSCs细胞细胞增殖活性都明显增加（P＜0.05）,凋亡细胞比例、ROS水平表达水平均显著降低（P＜0.05）;与CON组比较,GLU组p-p38MAPK表达水平明显上升,普罗布考预处理能明显抑制高糖诱导的p-p38MAPK表达水平上调.结论 普罗布考能帮助hADSCs对抗高糖引起的损伤;p38MAPK通路参与高糖对hADSCs的损伤作用;普罗布考可通过抑制p38MAPK通路的激活保护hADSCs对抗高糖诱导的损伤.
- 王哲刘晓玉张殿宝王喜良林学文王秋实
- 关键词：脂肪间充质干细胞P38MAPK活性氧
