章正琰
- 作品数：4 被引量：21H指数：3
- 供职机构：中国医学科学院基础医学研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 红细胞分化去核因子:哺乳类红细胞终末分化/肿瘤抑制的调节因子家族及其相关基因的克隆被引量：4
- 2000年
- 本文报道哺乳类红细胞终末分化去核因子 (EDDF)调控恶性骨髓瘤细胞的分化以及与 EDDF相关的基因克隆的系列研究结果。以不同分化期哺乳类红细胞为研究对象 ,观察红细胞自然排核前后的细胞形态变化和与之互为对应的物质代谢的改变 ,分析 EDDF与终末分化、核浓缩及自然排核的可能关系 ;用自建的红细胞胞质体杂交模型 ,分别对红白血病和非红系的骨髓瘤细胞进行同种和异种的细胞杂交实验以验证 EDDF的作用规律。结果表明 ,哺乳类红细胞在终末分化不同阶段存在时相相关的分化去核因子家族。这些因子可调控不同分化阶段相关基因的活动 ,且呈时序性出现 ,与血红蛋白表达、细胞核停止分裂转向分化、核偏位、核浓 (固 )缩和自然去核等终末分化特征呈现明显的因果关系。 EDDF活性蛋白可逆转体外培养的肿瘤细胞系 (MEL,K5 6 2 )的恶性生长及诱导终末分化。在上述基础上分别采用不同的分离、提纯及基因克隆路线 ,从人和小鼠红细胞中连续克隆到 5种分化相关基因家族 (MEDDF,HEDDF- 1,HEDRF- 1,HEDRF- 2 ,HCNBP- 1)及其全长序列 ,并经 Gen Bank证实 ,它们均为无同源的新基因序列。
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- 关键词：终末分化基因克隆
- 真核基因转录与染色质修饰机制及转录因子间的关系被引量：1
- 2000年
- 真核基因的表达调控是当前分子生物学研究领域的前沿科学,其中的发展日新月异,涉及面广,从染色质结构的改变到转录因子间的相互作用形成了一个复杂的网络关系,各因素之间的协调作用是真核生物体内基因表达调控的关键所在。
- 章正琰薛社普
- 关键词：真核细胞基因表达转录调控染色质转录因子
- 小鼠红细胞分化去核相关因子(MEDDF)cDNA克隆及全序列分析被引量：6
- 1999年
- 以小鼠脾红细胞减除杂交克隆得到的分化相关特异cDNA片段为探针 ,用噬菌体原位杂交结合PCR鉴定的方法 ,从小鼠中晚幼红细胞cDNA文库中筛选出一个阳性cDNA克隆 .将其亚克隆至pBluescript SK载体上测序 ,结果表明该cDNA为小鼠红细胞分化去核相关因子(MEDDF)cDNA全序列 .该序列全长为 5 0 5bp ,其中有一个起始于第 5 3位 ,终止于第 3 5 9位的开放阅读框架 ,编码区长 3 0 9bp ,共编码 10 2个氨基酸和一个终止密码 ,其 5′端起始密码ATG附近的碱基序列符合真核生物基因的Kozak顺序 ,第 462位有一加尾号AATAA ,3′端有一个由2 6个腺苷酸组成的PolyA尾 .根据GenBank最新资料检索 ,这一小鼠的红细胞分化相关基因为一未见报道的新序列 (GenBankAccessionNumber:BankIt180 846AF0 60 2 2 0 ) .经Northern印迹分析发现 ,该cDNA仅在与造血相关的器官及中晚幼红细胞中表达 ,提示它是一个与小鼠红细胞终末分化相关的新基因 .
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- 关键词：红细胞分化CDNA克隆
- 小鼠红细胞分化-去核因子的发育期相关性表达与鉴定被引量：10
- 2001年
- 以质粒pBS-SK-MEDDF上的小鼠 MEDDF cDNA片段为模板, 通过PCR方法删除该片段的非编码序列, 将编码序列克隆到pGEM-T-Easy质粒中, 经DNA序列测定后, 证明其克隆序列正确, 再将MEDDF编码序列定向克隆到表达载体pET-30α(+)的BamHⅠ和HindⅢ位点之间, 构建了原核表达载体, 在获高效表达菌株中, 特异表达蛋白质的量占细菌总蛋白的40%. 以纯化的该蛋白质为抗原, 免疫新西兰纯种大耳兔, 获得高效价的抗血清. 经免疫细胞化学验证, MEDDF在红细胞的表达具有发育阶段特异性, 推测与小鼠红细胞终末分化的启动及细胞核浓缩相关. 另外, MEDDF还在小鼠骨髓中的粒细胞系及巨核细胞系表达, 说明该蛋白质与小鼠骨髓髓系细胞的分化有渊源关系.
- 章正琰薛社普
- 关键词：发育期红细胞原核表达造血因子发育期
