何瑶
- 作品数：4 被引量：9H指数：2
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- 乙酰木聚糖酯酶协同木聚糖酶降解木聚糖的研究被引量：5
- 2016年
- 探讨了宇佐美曲霉(Aspergillus usamii)乙酰木聚糖酯酶和第10、11家族木聚糖酶之间的协同作用。利用作者所在实验室构建保藏的3株工程酵母Pichia pastoris GS115/Auaxe、GS115/Auxyn11A和GS115/Auxyn10A进行甲醇诱导发酵,分别获得重组乙酰木聚糖酯酶和木聚糖酶。在木聚糖酶最适p H、40℃、料液质量体积比1 g∶60 m L、水解2 h的条件下分别研究了不同加酶量作用于小麦麸皮时生成的还原糖量。结果表明,乙酰木聚糖酯酶与第11家族木聚糖酶有更好的协同作用,并在添加量比(酶活力比)为5∶1时所测协同效果最好,还原糖生成量较木聚糖酶单独作用增加了46%。因此,在乙酰木聚糖酯酶的作用下,木聚糖上乙酰基的去除,对提高木聚糖酶对木聚糖的水解效率具有重要作用。
- 朱天地何瑶杨标刘加驰邬敏辰
- 关键词：木聚糖酶木聚糖
- N-端置换提高木聚糖酶AoXyn11A的耐热性被引量：1
- 2017年
- 为提高米曲霉(Aspergillus oryzae)糖苷水解酶家族(GHF)11木聚糖酶AoXyn11A的耐热性,将其N-端置换为来源于嗜热裂孢菌(Thermobifida fusca)的同一家族耐热木聚糖酶pXYL11的对应区域。基于木聚糖酶耐热性的理性设计,采用大引物PCR技术将AoXyn11A基因(Aoxyn11A)的5′-端DNA片段置换为pXYL11人工合成基因(xyn11PM)的对应片段,构建出杂合木聚糖酶ATX11A基因(ATx11A)。分别将Aoxyn11A和ATx11A在毕赤酵母GS115中进行了表达,并分析了重组表达产物AoXyn11A和ATX11A的温度特性。结果表明:ATX11A的最适温度T_(opt)由AoXyn11A的50℃提升至65℃,在60℃的半衰期t_(1/2)^(60)为55 min,较AoXyn11A延长了41.3倍;ATX11A在55℃处理3 h保留60%以上的酶活性,而AoXyn11A处理15 min酶活性完全丧失。本研究通过N-端置换显著改善了AoXyn11A的温度特性。
- 何瑶吴芹殷欣胡蝶邬敏辰
- 关键词：木聚糖酶耐热性分子动力学模拟
- 乙酰木聚糖酯酶基因的克隆、表达及酶学性质研究被引量：1
- 2014年
- 乙酰木聚糖酯酶可以水解乙酰化木聚糖的O-乙酰基,消除木聚糖酶水解木聚糖时该基团产生的空间阻碍作用。以宇佐美曲霉（Aspergillus usamii）E001菌株的总RNA为模板,利用RT-PCR技术扩增了乙酰木聚糖酯酶成熟肽的编码基因（Auaxe）,并构建了重组表达质粒p PIC9K^M-Auaxe,SalⅠ线性化后电转入毕赤酵母（Pichia pastoris）GS115中,经G418抗性筛选及甲醇诱导表达72 h,获得了重组乙酰木聚糖酯酶（reAuAxe）,其酶活性为35.6 U/m L。发酵液经纯化获得电泳纯reAuAxe,其表观相对分子质量约为3.4×10^4,比酶活性为390.5 U/mg。纯化后reAuAxe的最适反应温度为50℃,在45℃及以下稳定;其最适反应pH为6.0,在pH 4.5-7.0范围内稳定;所测的多数金属离子及EDTA对其酶活性影响不大。
- 朱天地殷欣邬敏辰何瑶唐存多
- 关键词：宇佐美曲霉基因克隆酶学性质
- 耐热木聚糖酶基因xyn11^(EM)在大肠杆菌中的表达被引量：2
- 2016年
- 将人工合成经密码子优化的11家族耐热木聚糖酶基因xyn11^(EM)克隆至表达质粒p ET-28a(+)中,获得重组质粒p ET-28a-xyn11^(EM)。将其转化Escherichia coli BL21(DE3),构建表达耐热木聚糖酶的重组工程菌E.coli BL21/xyn11^(EM)。用IPTG诱导表达重组木聚糖酶Xyn11^(EM)(re Xyn11^(EM)),酶活性可达47.5 U/m L。SDS-PAGE分析显示,re Xyn11^(EM)的表观相对分子质量为24 800。re Xyn11^(EM)的最适反应温度为70℃,在70℃以下稳定。最适反应p H为6.5~7.0,在p H5.0~8.0范围内稳定。大多数金属离子和EDTA对该重组酶的活性影响不大。re Xyn11^(EM)的Km和Vmax值分别为7.2 mg/m L和54.7 U/mg。结果表明xyn11^(EM)成功在E.coli中实现了异源表达,其良好的热稳定性具有较好的工业应用潜力。
- 何瑶殷欣吴芹邬敏辰
- 关键词：耐热木聚糖酶大肠杆菌表达酶学性质
