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乌苏里貉TLR8基因的分子克隆、序列分析及组织表达分析: 2016年; 为了解乌苏里貉TLR8基因特点及其在不同组织中的表达水平,本研究利用RT-PCR和RACE技术克隆其c DNA全长序列,应用生物学软件分析该基因及预测其编码蛋白的特征,并对该基因在乌苏里貉不同组织中的表达水平进行检测。结果显示该基因全长3 191 bp,ORF全长3 117 bp,编码1 038 aa,含有Toll-like受体家族典型的结构域特征。同源性分析显示乌苏里貉TLR8基因核苷酸序列与犬同源性最高,达99.3%,与其他食肉目哺乳动物也具有较高的同源性,在89.2%-92.9%。组织表达分析显示TLR8基因在乌苏里貉各组织中广泛表达但表达量存在差异。本研究结果为进一步研究乌苏里貉抗病毒免疫及育种相关研究奠定了基础。; 仝明薇易立程悦宁曹智刚王建科赵航林鹏程世鹏; 关键词：乌苏里貉

水貂肠炎病毒VP2基因原核表达及鉴定被引量：9: 2015年; 采用PCR技术扩增MEV VP2基因,将该基因片段定向克隆原核表达载体PET-30a,构建MEV VP2基因原核表达重组质粒PET-30a-VP2。将该重组质粒转化到宿主菌BL21(DE3),IPTG诱导后进行SDSPAGE和Western-blotting分析。结果表明:该基因全长1 755 bp,其目的基因序列完全正确,能编码584个氨基酸。利用载体上的His标签对其进行纯化,经SDS-PAGE鉴定该重组蛋白以包涵体的形式存在,大小约为70 ku;Western-blotting验证该重组蛋白具有被抗MEV血清识别的特性,具有良好的反应原性,可为MEV基因工程亚单位疫苗、免疫学诊断方法等提供参考。; 林鹏王红梅王建科赵航郭利杨勇程悦宁张淼程世鹏; 关键词：水貂肠炎病毒 VP2基因原核表达

用于检测不同亚型犬细小病毒的引物对和探针的组合产品: 本发明涉及一种用于检测不同亚型犬细小病毒的引物对和探针的组合产品。所述引物对和探针的组合产品选自如下引物对探针组合中的任一组或全部：第一组：探针CPV‑2‑305‑P和/或CPV‑2a‑305‑P；上、下游引物CPV‑3...; 王建科程悦宁孙亚茹程世鹏林鹏易立仝明薇; 文献传递

水貂细小病毒性肠炎病原体抗原胶体金检测试纸条及其制备方法: 水貂细小病毒性肠炎病原体抗原胶体金检测试纸条及其制备方法，涉及毛皮动物病毒性传染病病原的检测技术领域。本发明的胶体金检测试纸条包括：样品垫、金标垫、NC膜和吸收垫，所述NC膜的检测线上喷涂VP2蛋白，所述NC膜的质控线上...; 王建科程悦宁张淼程世鹏林鹏赵航易立仝明薇曹智刚孙亚茹闫喜军陈立志; 文献传递

犬瘟热病毒截短P蛋白的表达及纯化被引量：1: 2019年; 为获得犬瘟热病毒(CDV)野毒株截短磷蛋白(aa232~507),以Asia 1型CDV-PS为基础,经PCR扩增得到P(aa232~507)基因,插入原核表达载体pEASY^R-Blunt E1中,构建重组原核表达载体pEASY^R-Blunt E1-CDV-P;将重组质粒转化到BL21感受态细胞中进行原核表达并对诱导条件进行优化;超声破碎最佳条件下的诱导产物经离心后对重组蛋白进行可溶性分析,随后用镍柱对重组截短P蛋白进行纯化并用SDS-PAGE和Western blot进行鉴定。结果显示:重组P蛋白大小约37 kDa,在IPTG终浓度0.1 mmol/L,诱导时间为8 h时,表达量最高;重组P蛋白以包涵体形式存在,经SDS-PAGE和Western blot鉴定,成功纯化出重组截短P蛋白;重组P蛋白具有良好的免疫反应性。本研究成功制备出CDV-PS截短P蛋白,为进一步P蛋白抗原表位的研究和CDV抗体诊断方法的研发奠定基础。; 李爽易立程悦宁曹智刚林鹏程世鹏; 关键词：犬瘟热病毒原核表达蛋白纯化

一种用于鉴别FPV和CPV的HRM引物组，含有该引物组的试剂盒及其应用: 本发明公开了一种用于鉴别犬细小病毒(CPV)和猫细小病毒(FPV)的HRM引物组，含有该引物组的试剂盒及其应用。所述的引物组由上游引物和下游引物组成，所述的上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述的下游引物...; 王建科程悦宁孙亚茹程世鹏林鹏易立仝明薇; 文献传递

犬瘟热病毒感染小鼠脾淋巴细胞所引起的主要基因表达情况的变化: 2014年; 采用基因芯片技术对正常小鼠淋巴细胞和犬瘟热病毒(CDV)感染后第7天的小鼠淋巴细胞基因表达的差异性进行了比较,从分子水平上探究了CDV感染机体后的免疫应答情况。结果显示,检测到364个差异表达基因,其中280个基因的表达水平升高,84个基因的表达水平下降。进一步以基因芯片中CDV感染后上调基因C-C型趋化因子受体2(CCR2)和下调基因CD14为研究对象,应用实时荧光定量方法验证基因芯片的结果,两者完全相符,说明芯片的筛查结果可靠。根据基因芯片的结果,采用Go注释系统和数据库查询,对364个差异表达基因进行功能注释,结果显示,差异表达基因主要与水解、结合、转运调控、信号传递、代谢、结构组成等有关,其中CCR2基因、CD14基因、丝裂原活化蛋白激酶1(MAP3K1)基因、CD69基因等被鉴定为差异表达基因。上述结果为进一步阐明CDV感染后机体的免疫应答机制奠定了基础。; 仝明薇易立程悦宁王建科赵航林鹏程世鹏; 关键词：基因芯片犬瘟热病毒差异表达基因

水貂细小病毒性肠炎病原体抗原胶体金检测试纸条及其制备方法: 水貂细小病毒性肠炎病原体抗原胶体金检测试纸条及其制备方法，涉及毛皮动物病毒性传染病病原的检测技术领域。本发明的胶体金检测试纸条包括：样品垫、金标垫、NC膜和吸收垫，所述NC膜的检测线上喷涂VP2蛋白，所述NC膜的质控线上...; 王建科程悦宁张淼程世鹏林鹏赵航易立仝明薇曹智刚孙亚茹闫喜军陈立志; 文献传递

抗犬瘟热病毒核蛋白单克隆抗体的制备及其线性抗原表位鉴定被引量：4: 2017年; 为制备犬瘟热病毒(CDV)单克隆抗体(MAb),本研究用腺病毒表达的CDV截短N蛋白(aa401~aa523)免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合并筛选到2株能够稳定分泌抗CDV N蛋白的MAb,命名为N1-C8和N1-C41。经间接ELISA测定N1-C8和N1-C41培养上清液及小鼠腹水效价分别为1∶1 024、1∶106和1∶512、1∶105。通过肽扫描的方法筛选出N1-C8的抗原表位为线性表位^(440)ENQGGDKYPIHFNDE454,但并未能够筛选出N1-C41的抗原表位,推测可能是因为其抗原表位为空间构象型。Western blot结果显示N1-C8和N1-C41两株MAb在识别CDV的不同毒力病毒株上有差异,可能与CDV强弱病毒株在N蛋白的差异变化有关。本研究两株MAb的制备为CDV不同毒力株的鉴别诊断提供了可能。; 曹智刚易立程悦宁仝明薇李爽王建科林鹏孙亚茹程世鹏; 关键词：犬瘟热病毒单克隆抗体免疫荧光

检测水貂阿留申病毒的特异性引物及其在筛选健康水貂中的应用: 检测水貂阿留申病毒的特异性引物及其在筛选健康水貂中的应用，本发明的目的是针对水貂的阿留申病毒设计高灵敏度特异性检测引物，并将该引物应用于筛选未患阿留申病的水貂，该方法通过快速准确的检测水貂粪便是否携带阿留申病毒，进而判定...; 易立程悦宁程世鹏陈立志仝明薇岳志刚王建科赵航林鹏; 文献传递

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