郑菲
- 作品数：13 被引量：25H指数：3
- 供职机构：武汉大学中南医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金武汉市青年科技晨光计划湖北省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生文化科学更多>>
- 细胞焦亡相关指标与大麻素2型受体表达量的相关性分析
- 2020年
- 目的:探讨在脂多糖(LPS)诱导的巨噬细胞焦亡模型中,焦亡相关指标与大麻素2型受体(CB2R)表达量的相关性。方法:体外培养RAW264.7小鼠巨噬细胞株,用不同浓度LPS刺激巨噬细胞建立细胞焦亡模型。用Western Blot和实时荧光定量(RT-PCR)法检测CB2R和焦亡相关指标NLRP3、Caspase-1、Caspase-11和GSDMD的表达,并采用Pearson法分别分析NLRP3、Caspase-1、Caspase-11和GSDMD与CB2R之间的相关性。结果:巨噬细胞在接受LPS刺激后,CB2R和焦亡相关指标NLRP3、Caspase-1、Caspase-11、GSDMD的表达升高,且随着LPS刺激浓度的上升,以上指标的表达均明显上调(P<0.05)。相关性分析显示,NLRP3、Caspase-1、Caspase-11、GSDMD表达均与CB2R呈显著正相关(r>0.9,P<0.01)。结论:在不同浓度LPS作用下,巨噬细胞焦亡与CB2R的表达呈高度正相关,CB2R可能参与了巨噬细胞焦亡的调节过程。
- 刘安鹏张彬刘强胜郑菲袁清红詹佳陈凯
- 关键词：巨噬细胞脂多糖
- 盐酸戊乙奎醚对内毒素刺激的肺微血管内皮细胞的作用及对β-抑制蛋白-2的影响
- 2017年
- 目的:探讨在内毒素(LPS)作用下盐酸戊乙奎醚(PHCD)对肺微血管内皮细胞的作用及β-抑制蛋白-2(β-arrestin-2)表达的影响。方法:培养人肺微血管内皮细胞,用随机数字表法将其分为4组:正常对照组(C组)、LPS诱导组(L组)、PHCD+LPS组(PL组)及PHCD对照组(P组)。P组和PL组加入终浓度为2μg/ml的PHCD,L组及PL组加入终浓度为0.1μg/ml的LPS,PL组于加入PHCD后60min再加入LPS,C组加入同等体积的培养基。加入LPS 60min后,测细胞LDH水平、VCAM-1、VE-cadherin表达及β-arrestin-2的表达。结果:与C组比较,L组细胞LDH水平、VCAM-1表达升高,VE-cadherin和β-arrestin-2表达降低;与L组比较,PL组细胞LDH水平、VCAM-1表达降低,而VE-cadherin和β-arrestin-2表达增加。结论:盐酸戊乙奎醚预处理,可以通过上调β-arrestin-2的表达,减轻LPS引起的肺微血管内皮细胞损伤。
- 姚曙东郑菲詹佳
- 关键词：盐酸戊乙奎醚人肺微血管内皮细胞血管内皮钙黏蛋白
- 激活大麻素2型受体在LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞炎症因子分泌中的作用及其可能机制被引量：2
- 2019年
- 目的探讨激活大麻素2型受体(Cannabinoid receptor 2,CB2R)在脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的RAW264.7巨噬细胞炎症因子分泌中的作用及其可能机制。方法将巨噬细胞以1×105/mL的密度接种于6孔培养板(2 mL/孔),采用随机数字表法将其分为4组(n=6):对照组(C组)、LPS组(LPS组)、LPS+CB2R激动剂HU308组(LPS+HU308组)、LPS+CB2R激动剂HU308+3-甲基腺苷组(LPS+HU308+3-MA组)。LPS组、LPS+HU308组和LPS+HU308+3-MA组加入终浓度为1 μg/mL的LPS,孵育15 min时,LPS+HU308+3-MA组加入终浓度为10 mmol/L的3-MA,继续孵育15 min,LPS+HU308组和LPS+HU308+3-MA组加入终浓度为10 μmol/L的HU308孵育24 h。采用ELISA法检测各组细胞上清液中TNF-α、IL-1β和IL-18的浓度;采用RT-PCR法检测ICAM-1和NLRP3 mRNA的表达水平,采用western blot法检测LC3和Beclin1的表达水平,并计算LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值。结果与C组比较,LPS组TNF-α[(228.86±10.20) pg/mL vs (140.05±5.54) pg/mL、IL-1β[(363.62±8.14) pg/mL vs (244.82±9.11) pg/mL]和IL-18[(293.28±13.57) pg/mL vs.(202.84±9.54) pg/mL]的浓度升高(均P<0.05),ICAM-1[(5.88±0.32) vs.(1.00±0.03)]和NLRP3[(8.07±0.93) vs.(1.01±0.05)] mRNA表达升高(均P<0.05),LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值[(0.50±0.03) vs.(0.40±0.06)]和Beclin1[(0.51±0.04) vs.(0.16±0.03)]表达上调(均P<0.05);与LPS组比较,LPS+HU308组TNF-α[(165.44±7.07) pg/mL]、IL-1β[(272.09±3.35) pg/mL]和IL-18[(220.41±6.01) pg/mL]的浓度降低(均P<0.05),ICAM-1[(3.21±0.35)]和NLRP3[(1.54±0.30)] mRNA表达降低(均P<0.05),LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值[(0.71±0.03)]和Beclin1[(0.71±0.02)]表达上调(均P<0.05);与LPS+HU308组比较,LPS+HU308+3-MA组TNF-α[(197.06±5.59) pg/mL]、IL-1β[(318.98±11.54) pg/mL]和IL-18[(243.33±8.71) pg/mL]的浓度升高(均P<0.05),ICAM-1[(4.04±0.21)]和NLRP3 [(5.87±0.77)] mRNA表达升高(均P<0.05),LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值[(0.44±0.08)]和Beclin1[(0.32±0.03)]表达下调(均P<0.05)。结论激活大麻素2型受体可抑制脂多糖诱导的RAW264.7巨噬细胞炎症因子分泌,�
- 袁清红刘安鹏刘强胜郑菲张宗泽王焱林詹佳
- 关键词：炎症因子分泌RAW264.7巨噬细胞
- 大麻素2型受体在脂多糖诱导小鼠巨噬细胞焦亡中的作用被引量：2
- 2020年
- 目的评价大麻素2型受体(CB2R)在脂多糖(LPS)诱导小鼠巨噬细胞焦亡中的作用。方法常规培养小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞,采用随机数字表法分为3组(n=18):对照组(C组)、LPS组(LPS组)和CB2R激动剂HU308组(HU308组)。C组细胞不给予药物处理,余2组加入LPS,终浓度为1μg/ml,孵育15 min时HU308组加入HU308,终浓度为10μmol/L继续孵育6 h。采用RT-PCR法检测NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)、caspase-1、caspase-11和消皮素D(GSDMD)的mRNA表达,采用Western blot法检测NLRP3、caspase-1、caspase-11、GSDMD及其C末端(GSDMD-C)表达,计算GSDMD-C/GSDMD比值,采用ELISA法检测培养液IL-18和IL-1β的浓度。结果与C组比较,LPS组NLRP3、caspase-1、caspase-11、GSDMD和GSDMD-C表达上调,GSDMD-C/GSDMD比值升高,培养液IL-18和IL-1β浓度升高(P<0.05);与LPS组比较,HU308组NLRP3、caspase-1、caspase-11、GSDMD和GSDMD-C表达下调,GSDMD-C/GSDMD比值降低,培养液IL-18和IL-1β浓度降低(P<0.05)。结论CB2R参与了LPS诱导巨噬细胞焦亡的过程。
- 刘安鹏李祯张彬刘强胜郑菲袁清红陈凯张宗泽王焱林詹佳
- 关键词：脂多糖类巨噬细胞
- 提高麻醉实习教学质量的探讨被引量：1
- 2016年
- 通过麻醉实习带教实践,从三个方面对提高麻醉实习教学质量进行探讨:完善带教教师队伍、对学生理论及操作能力严格训练、采用不同的教学方式调动实习学生的主观能动性。这些方法提高了麻醉实习教学质量,增强了学生对麻醉实习的兴趣,使学生的临床实践能力得到较大提升。
- 詹佳郑菲张宗泽
- 关键词：麻醉实习教学教学质量
- M3受体在盐酸戊乙奎醚减轻内毒素诱导人肺微血管内皮细胞损伤中的作用被引量：1
- 2018年
- 目的 评价M3受体在盐酸戊乙奎醚(PHC)减轻内毒素(LPS)诱导人肺微血管内皮细胞损伤中的作用.方法 正常人肺微血管内皮细胞和M3 shRNA转染人肺微血管内皮细胞,以1×105个∕ml的密度接种于6孔板(2 ml∕孔)或培养瓶(4 ml∕瓶)中,采用随机数字表法分为5组(n=5):对照组(C组)、LPS组、PHC+LPS组(P+LPS组)、LPS+M3 shRNA转染组(LPS+shRNA组)和PHC+LPS+M3 shRNA转染组(P+LPS+shRNA组).C组不给予药物处理;余各组均加入终浓度为0.1μg∕ml LPS;P+LPS组和P+LPS+shRNA组于加入LPS前1 h加入PHC 2μg∕ml;LPS+shRNA组和P+LPS+shRNA组以含2.5 nmol∕L M3受体shRNA的质粒转染细胞.加入LPS后1 h时,采用流式细胞仪测定内皮细胞纤维状肌动蛋白(F-actin)的含量;免疫荧光法检测肌球蛋白轻链激酶(MLCK)和血管内皮钙黏蛋白(VE-cadherin)的表达;Western blot法检测NF-κB p65和IκB的表达;ELISA法测定TNF-α和IL-6的含量;实时定量PCR法分别检测加入LPS后10、30和60 min时M3受体mRNA表达水平.结果 与C组比较,LPS组和P+LPS组F-actin含量降低,VE-cadherin和IκB表达下调,TNF-α和IL-6含量升高,MLCK和NF-κB p65表达上调(P<0.05);与C组比较,LPS组M3受体mRNA表达上调(P<0.05),P+LPS组差异无统计学意义(P>0.05);与LPS组比较,P+LPS组和LPS+shRNA组F-actin含量升高,VE-cadherin和IκB表达上调,TNF-α和IL-6浓度降低,MLCK、NF-κB p65和M3受体mRNA表达下调(P<0.05);与P+LPS组比较,P+LPS+shRNA组F-actin含量升高,VE-cadherin和IκB表达上调,TNF-α和IL-6浓度降低,MLCK、NF-κB p65和M3受体mRNA表达下调(P<0.05).结论 PHC可通过干扰M3受体,抑制NF-κB介导炎性反应,减轻LPS诱导的人肺微血管内皮细胞损伤.
- 刘强胜颜学滔刘安鹏袁清红沈石文郑菲张宗泽陈凯王焱林詹佳
- 关键词：胆碱能拮抗剂内毒素类内皮细胞
- 超声引导在肌间沟臂丛神经阻滞教学中的应用被引量：3
- 2018年
- 目的探讨超声引导技术在臂丛神经阻滞麻醉教学中的应用。方法选取规范化培训住院医师20名，随机分为A组（解剖定位组）和B组（超声引导组）。记录每名医师神经阻滞操作的成功率及神经阻滞效果，并分析其对临床教学效果的评价。结果B组医师神经阻滞成功率及阻滞效果均较A组明显提高，对于临床教学效果的评价明显提高。结论超声引导下肌问沟臂丛神经阻滞麻醉应用于临床教学，阻滞效果完善，教学质量提高，能获得更好的教学评价。
- 沈石文袁清红刘强胜郑菲詹佳
- 关键词：超声臂丛阻滞教学
- 脓毒症急性肺损伤模型中肺组织细胞焦亡与大麻素2型受体的相关性分析被引量：4
- 2022年
- 目的探讨在小鼠脓毒症急性肺损伤模型中,焦亡相关指标与大麻素2型受体(cannabinoid 2 receptor,CB2R)表达量的相关性。方法采用随机数字表法把实验小鼠随机分为4组(n=6):假手术组(sham)、轻度脓毒症组(ALIMi)、中度脓毒症组(ALIMo)、重度脓毒症组(ALIS)。采用盲肠结扎穿孔法(cecal ligation and puncture,CLP)建立小鼠的脓毒症急性肺损伤模型。术后12 h采集肺组织标本,测定肺组织湿干重比及肺组织损伤评分;检测肺组织CB2RmRNA及蛋白表达水平、焦亡相关指标(NLRP3、caspasse-1、caspase-11、GSDMD)的mRNA转录水平及肺组织炎症因子(IL-6、TNF-α)的水平;利用SPSS软件进行数据分析,采用单因素方差分析法进行各项指标的多组间比较,分别采用LSD或Games-Howell检验进行两组间比较,利用Pearson法分别分析炎症因子和焦亡相关指标与CB2R之间的相关性。结果通过单因素方差分析获得统计量F值,并进行两组间比较。与sham组比较,在脓毒症模型中,IL-6、TNF-α、CB2RmRNA、CB2R蛋白以及NLRP3、caspase-1、caspase-11、GSDMD mRNA表达升高(P<0.05);与ALIMi组比较,ALIMo组小鼠肺组织IL-6[(277.31±41.07)vs.(140.09±27.56),P<0.05]、TNF-α[(501.09±73.91)vs.(261.36±40.73),P<0.05]、CB2RmRNA[(2.99±0.28)vs.(2.02±0.19),P<0.05]、CB2R蛋白[(0.44±0.08)vs.(0.23±0.05),P<0.05]以及NLRP3[(2.53±0.26)vs.(1.61±0.15),P<0.05]、caspase-1[(6.02±0.35)vs.(3.60±0.38),P<0.05]、caspase-11[(11.43±0.83)vs.(6.30±0.65),P<0.05]、GSDMD[(10.46±0.62)vs.(5.67±0.54),P<0.05]mRNA表达升高;与ALIMo组比较,ALIS组小鼠肺组织中IL-6[(475.90±67.65)vs.(277.31±41.07),P<0.05]、TNF-α[(713.93±58.85)vs.(501.09±73.91),P<0.05]、CB2RmRNA[(4.00±0.19)vs.(2.99±0.28),P<0.05]、CB2R蛋白[(0.61±0.05)vs.(0.44±0.08),P<0.05]以及NLRP3[(4.75±0.40)vs.(2.53±0.26),P<0.05]、caspase-1[(8.76±0.72)vs.(6.02±0.35),P<0.05]、caspase-11[(16.31±1.13)vs.(11.43±0.83),P<0.05]、GSDMD[(16.46±1.22)vs.(10.46±0.62),P<0.05]mRNA表达升高。
- 张彬杨宗斌李祯刘安鹏杨柳郑锋郑菲詹佳
- 关键词：脓毒症急性肺损伤
- β-抑制蛋白-1在盐酸戊乙奎醚抑制LPS致人肺微血管内皮细胞MAPK信号通路激活中的作用被引量：3
- 2016年
- 目的探讨β-抑制蛋白-1在盐酸戊乙奎醚抑制LPS致人肺微血管内皮细胞丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号通路激活中的作用。方法将人肺微血管内皮细胞以1×10^5个／ml的密度接种于6孔板（2ml／孔）或培养瓶（4ml／瓶）中，采用随机数字表法，将其分为5组（n=20）：空质粒转染组（C组）、LPS＋空质粒转染组（LPS组）、盐酸戊乙奎醚＋LPS＋空质粒转染组（P＋LPS组）、LPS＋β-抑制蛋白-1短发夹RNA（shRNA）转染组（LPS＋shRNA组）和盐酸戊乙奎醚＋LPS＋β-抑制蛋白-1shRNA转染组（P＋LPS＋shRNA组）。以空质粒1．5μg或含15nmol／L β-抑制蛋白-1shRNA的质粒转染细胞后，孵育24h时，LPS组和LPS＋shRNA组加入终浓度为0．1μg／ml的LPS孵育1h；P＋LPS组和P＋LPS＋shRNA组于加入终浓度为2μg／ml的盐酸戊乙奎醚，孵育1h时加入终浓度为0．1μg／ml的LPS孵育1h。采用流式细胞仪检测纤维状肌动蛋白（F-actin）表达水平，采用免疫荧光化学法检测肌球蛋白轻链激酶（MLCK）和血管内皮钙黏蛋白（VE—cadherin）的表达水平，采用Western blot法检测磷酸化细胞外信号调节激酶（p-ERK1／2）和磷酸化c—Jun氨基末端激酶（p-JNK）的表达水平。采用RT—PCR法检测β-抑制蛋白-1mRNA表达水平。结果与c组比较，LPS组细胞F—actin、VE—cadherin和β-抑制蛋白-1mRNA的表达下调，MLCK、p-ERK1／2和p-JNK的表达上调，P＋LPS组细胞p-ERK1／2和p-JNK表达上调（P〈0．05），其余指标表达差异无统计学意义（P〉0．05）；与LPS组比较，P＋LPS组细胞F—actin、VE—cadherin和β-抑制蛋白-1mRNA的表达上调，MLCK、p-ERKI／2和p-JNK的表达下调，LPS＋shRNA组细胞F—actin、VE—cadherin和β-抑制蛋白-1mRNA的表达下调，MLCK和p-JNK的表达上调（P〈0．05）；与P＋LPS组比较，P＋LPS＋shRNA组细胞F—actin、VE—cadherin和β-抑制蛋白-1mRNA的表达下调，MLCK、p-ERK1／2和p-
- 郑菲王轶芃张宗泽陈凯王焱林詹佳
- 关键词：抑制蛋白类胆碱能拮抗剂内毒素类内皮细胞细胞JNK丝裂原活化蛋白激酶类
- M3受体在盐酸戊乙奎醚减轻内毒素致人肺微血管内皮细胞通透性增高中的作用：与MAPK信号通路的关系
- 2017年
- 目的评价M3受体在盐酸戊乙奎醚减轻内毒素致人肺微血管内皮细胞通透性增高中的作用及其与丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号通路的关系。方法将人肺微血管内皮细胞以1×105个/ml的密度接种于6孔板（2 ml/孔）或培养瓶（4 ml/瓶）中，采用随机数字表法分为6组（n＝5）：空白对照组（C组）、M3受体shRNA转染组（shRNA组）、脂多糖组（LPS组）、盐酸戊乙奎醚＋脂多糖组（P＋LPS组）、脂多糖＋M3受体shRNA转染组（LPS＋shRNA组）和盐酸戊乙奎醚＋脂多糖＋M3受体shRNA转染组（P＋LPS＋shRNA组）。shRNA组、LPS＋shRNA组和P＋LPS＋shRNA组以含2.5 nmol/L M3受体shRNA的质粒转染细胞。LPS组和LPS＋shRNA组于孵育24 h时加入终浓度为0.1 μg/ml的LPS孵育1 h；P＋LPS组和P＋LPS＋shRNA组于孵育24 h时加入终浓度为2 μg/ml的盐酸戊乙奎醚，孵育1 h后加入终浓度为0.1 μg/ml的LPS再孵育1 h。采用Transwell法测定肺微血管内皮细胞通透性，采用Western blot法测定磷酸化p38 MAPK（p-p38 MAPK）和磷酸化细胞外调节蛋白激酶（p-ERK1/2）的表达水平，采用免疫荧光染色法测定热休克蛋白27（HSP27）的表达水平，采用实时定量PCR法测定M3受体mRNA的表达。结果与C组比较，shRNA组M3受体mRNA表达下调，LPS组细胞通透性增高，p-p38 MAPK、p-ERK1/2、HSP27、和M3受体mRNA表达上调（P〈0.05）；与LPS组比较，P＋LPS组、LPS＋shRNA组和P＋LPS＋shRNA组细胞通透性降低，p-p38 MAPK、p-ERK1/2、HSP27和M3受体mRNA表达下调（P〈0.05）；与LPS＋shRNA组比较，P＋LPS＋shRNA组细胞通透性降低，p-p38 MAPK、p-ERK1/2、HSP27和M3受体mRNA表达下调（P〈0.05）。结论盐酸戊乙奎醚减轻内毒素致人肺微血管内皮细胞通透性增高的机制与其下调M3受体表达后抑制MAPK信号通路激活有关。
- 沈石文刘强胜郑菲袁清红王轶芃张宗泽陈凯王焱林詹佳
- 关键词：内皮细胞P38丝裂原活化蛋白激酶类细胞外信号调节MAP激酶类
