建立了一种木薯细菌性萎蔫病菌的环介导恒温扩增快速检测方法,为木薯细菌性萎蔫病的快速检测提供有力的技术支持。针对木薯细菌性萎蔫病菌TAL效应器蛋白质(pthBXam)靶序列的6个位点设计4条特异性引物,并对反应温度和内引物浓度等参数进行了优化,设计的引物与试验中提供的其他黄单胞近缘种都没有扩增反应,表现了较好的特异性。LAMP方法对木薯细菌性萎蔫病菌菌株DNA的检测下限为1pg/μL,比常规PCR灵敏度高100倍。该方法采用SYBR Green I染料法对扩增产物闭管检测,裸眼观察颜色变化判断反应结果,能快速、准确地对田间样品进行检测,没有出现假阳性和假阴性。与其他检测方法相比,LAMP方法检测时间短,效率高,降低了设备投入,易于操作,适合木薯细菌性萎蔫病菌的现场检疫和大规模监测。
目的在参展青岛世界园艺博览会的荷兰进口马蹄莲植株上,发现叶片有明显褐色软腐症状,为明确引起马蹄莲软腐病的病原,对叶片进行病菌的分离鉴定。方法采用组织分离法,从荷兰入境马蹄莲植株的病变叶片中分离纯化到2株致病性细菌菌株(MTL1、MTL2),对该菌株进行鉴定和生物学特性研究。结果形态及培养特征、生理生化特性的研究结果表明该菌株在NA培养基上能形成白色圆形单菌落,薄而平滑、边缘整齐,光滑不透明,KB培养基上划线培养后可产生明显的绿色的荧光。显微镜下菌体呈杆状,具多根极生鞭毛,革兰氏阴性菌。结论经形态鉴定、培养特征、生理生化及16S r DNA序列分析和致病性测定实验,确认引起马蹄莲细菌性软腐病的病原为边缘假单胞菌(Pseudomonas marginalis)。
